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乙型肝炎病毒和黄曲霉素协同作用诱发人肝细胞癌细胞株的建立
为了研究人乙型肝炎病毒(HBV)和黄曲霉素(AFB1)在肝癌发生过程中的作用,我们用HBV感染的人肝胎肝细胞移植至裸鼠背部皮下,以后每周皮下注射AFB1,在裸鼠体内成功地诱发了人肝细胞癌.选3只裸鼠所形成的种瘤组织,分别再接种裸鼠传代.在裸鼠体内传至5代后,将瘤组织在体外培养、传代,建立了3个肝癌细胞株,分别为CBH-1a、CBH-1b和CBH-2.对3个细胞株进行生物学持性分析发现,细胞生长迅速,接触抑制消失,细胞增殖核计数Ki67阳性细胞占38.2%.用EMA单抗检测证实为人来源细胞.核酸原位杂交显示,细胞中HBV-X和HBV-s基因阳性,PCR可扩增出X基因,证明HBV基因已到瘤细胞中.3个细胞株细胞再接种裸鼠皮下,可再生成肿瘤.此实验证明了HBV协同AFB1在人肝细胞癌发生过程中的病因作用.同时,为进步研究HBV和AFB1在肝癌发生过程中的分子机制提供了细胞水平的模型.
关键词： 人胚胎肝细胞 乙型肝炎病毒 黄曲霉素(AFB1) 肝癌细胞株 -
乙型肝-T炎病毒和黄曲霉素协同在裸鼠体内诱发人胎肝细胞癌变的研究
为了研究乙型肝炎(乙肝)病毒(HBV)和黄曲霉素(AFB1)在肝癌发生过程中的作用,用HBV感染的人胚胎肝细胞移植至裸鼠背部皮下,以后每周注射AFB1,能诱发裸鼠成瘤.实验分为4组:A组为HBV+AFB1组,即用HBV感染的人胚胎肝细胞移植于裸鼠,同时注射ABF1;B组为HBV+组,用HBV感染的人胚胎肝细胞移植于裸鼠,不注射AFB1;C组为AFB1+组,用不感染HBV的人胚胎肝细胞移植于裸鼠,注射AFB1;D组为对照组,用H不感染HBV的人胚胎肝细胞移植于裸鼠,也不注射AFB1.结果:A组成瘤率为27.3%(6/22),B组0%,C组13.3%(2/15),D组0%,所有肿瘤病理诊断均为肝细胞癌.用EMA单抗检测,证实为人来源细胞.PCR和DNA狭缝印迹显示:HBVX和u HBV S基因阳性,证明HBV基因已到瘤细胞中.实验首次用人乙肝病毒协同AFB1在裸鼠体内诱发成功人肝细胞癌,证明了 HBV协同AFB1在人肝细胞癌发生过程中的病因作用.同时,为进一步研究肝癌的发生及防治提供了良好的动物模型.
关键词： 人胚胎肝细胞 乙型肝炎病毒 黄曲霉素(AFB1) 恶性转化 -
人胚胎肝细胞体外培养相关技术研究进展
肝脏是人体代谢、生物转化的重要器官.肝脏疾病临床、药物代谢以及药效药性评价等医药研究都需要一个肝脏的体外模型作为研究平台.目前国内外研究认为,人胚胎肝细胞是构建肝脏体外研究模型的较理想材料.随着肝脏临床及基础研究的日益深入,对胚胎肝细胞体外模型的数量和质量的要求将越来越高.主要对人胚胎肝细胞的分离、培养、鉴定及冻存技术的研究进展进行综述.
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壳寡糖减弱乙醇对人胚胎肝细胞损伤的研究
目的 研究壳寡糖减弱乙醇时人胚胎肝细胞(L02细胞)损伤的原因. 方法 采用MTT法检测壳寡糖减弱乙醇对L02细胞的损伤;结合RT-PCR和Western blot方法分析壳寡糖的保护作用. 结果 壳寡糖能明显降低乙醇对L02细胞的损伤(P<0.01),尤其是0.2 mg/mL的壳寡糖,而这种作用是通过降低p53基因和蛋白的表达来实现的. 结论 壳寡糖有保护L02细胞抵制乙醇损伤的作用.
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原花青素B2及黄曲霉毒素B1对人胚胎肝细胞细胞色素P450亚酶1A2、3A4活力及基因表达的影响
目的 探讨原花青素B2(PC-B2)与黄曲霉毒素B1(AFB1)对人胚胎肝细胞L-02细胞色素P450 (CYP)亚酶1A2、3A4活力及其基因表达的影响.方法 L-02细胞体外培养后分空白对照、溶剂对照、AFB1染毒、PC-B2处理和PC-B2干预共5组,其中PC-B2处理分为3个亚组,分别采用3、10、30 μg/ml PC-B2干预,PC-B2干预分为3各亚组,分别采用3、10、30 μg/ml PC-B2预处理12 h后,再加不同浓度PC-B2与AFB1干预24 h.测定各组细胞的CYP1 A2、CYP3A4酶活力以及CYP1 A2、CYP3A4基因的mRNA表达水平;测定细胞存活率,倒置荧光显微镜观察细胞形态.结果 与空白对照组相比,AFB1染毒组细胞存活率降低(P＜0.05),胞膜结构不清,漂浮细胞增多,CYP1 A2、CYP3A4酶活力及其mRNA表达水平明显升高(P＜0.05).与空白对照组相比,3、10μg/ml PC-B2处理组细胞相关指标无明显变化,但30 μg/ml PC-B2处理组的细胞存活率升高,CYP1A2、CYP3A4酶活力下降(P＜0.05).与AFB1染毒比较,30 μg/ml PC-B2干预组的细胞存活率升高(P＜0.05),各浓度PC-B2干预组的细胞CYP1A2、CYP3A4酶活力及基因表达均降低(P＜0.05),且干预浓度越高,CYP1A2、CYP3A4酶活力及基因表达越低(P＜0.05).结论 AFB1能明显诱导肝细胞CYP1A2、CYP3A4酶活力及其mRNA表达,促使肝细胞凋亡,PC-B2干预可促进肝细胞生长并抑制上述CYP二个亚酶的活力及其基因表达,提示PC-B2可能通过抑制Ⅰ相代谢酶CYP对AFB1的活化而对肝细胞有良好保护作用.
