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c-erbB-2基因工程抗体的构建及在哺乳动物细胞中的表达
原癌基因HER-2/neu/erbB-2编码的185-kDa跨膜磷酸糖蛋白为受体酪氨酸激酶家族中的成员.已报道c-erbB-2在多种腺癌中过表达,其中包括15%～40%的早期及转移性乳腺癌和卵巢癌[1].亦有人报道,约73%的转移性乳腺癌和卵巢癌过表达HER-2/neu[2],表明其为乳腺癌靶向性免疫治疗的理想靶分子.我们采用基因工程技术,构建了c-erbB-2 ScFv基因,并获得了其在COS7细胞中的表达.
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抗人红细胞血型A抗原单链抗体原核表达及活性测定
目的构建并表达抗人红细胞血型A抗原单链小分子抗体(single-chain Fv)蛋白.方法设计合成抗重、轻链可变区引物,通过重叠延伸拼接PCR技术,在50A mAb VH和VL基因间引入连结短肽,体外构建50A ScFv基因并进行序列分析;将其克隆入表达载体pET-28a中,在大肠杆菌中诱导表达;并以免疫印迹测定重组蛋白的生物学活性.结果序列分析表明,50A ScFv基因全长747 bp,编码249个氨基酸;重组体表达产物聚丙烯酰胺凝胶电泳显示,融合蛋白的相对分子质量(Mr)为29 000左右,与预期的结果一致,表达产物主要以不溶性包涵体形式存在;光密度扫描结果表明,重组蛋白占菌体总蛋白的16.2%,免疫印迹试验显示,重组小分子抗体保留了亲本mAb的特异性亲和力.结论成功地构建50A ScFv基因,并在原核细胞中获得较高水平的表达,为进一步研制基因工程血型检定抗体奠定了基础.
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抗IgE抗体的研究进展
Ⅰ型变态反应性疾病,包括哮喘、过敏性鼻炎、特应性皮炎及食物过敏等,在过去的20年中发病率逐年上升,全世界约有1.0～1.5亿人患有哮喘,每年可导致约18万人死亡[1].估计全球为防治哮喘的经济代价已超过用于结核病和艾滋病的总和[2].目前,比较成熟的抗过敏疗法及脱敏疗法,仅以抗炎和缓解症状为目标,且存在较严重的副反应,治疗效果也不满意[2,3].因此,寻找更新、更特异的治疗途径是当务之急.
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基因工程抗体-从实验室构想到临床实践
随着基因工程和蛋白质工程等生物技术在抗体研制领域的广泛应用,基因工程抗体的种类日趋多样化,构建日趋合理化,在体内的生物学效应也日臻完善,使之较天然单克隆抗体的治疗效果更好,范围更广.大量动物实验和初步临床试验结果令人振奋.基因工程抗体正从实验室走向临床,为一些难治性疾病提供了新的有效的治疗手段.针对多种疾病的基因工程抗体纷纷进入了Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期临床试验阶段,已有十几种抗体获得FDA批准.与传统的化学治疗相比,抗体治疗的缺点是价格昂贵和市场范围小,限制了其在商业上的发展.因此需要进一步的基础免疫学研究阐明抗体的作用机制;发展抗体制备技术降低抗体的生产成本;进行更广泛的临床试验来研究抗体及其复合物怎样应用才能理想地提高疗效、降低毒副作用.
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抗白念珠菌人鼠嵌合抗体真核表达载体的构建与表达
目的 构建抗白念珠菌人鼠嵌合抗体的真核表达载体,并实现真核表达.方法 从含有单克隆天然抗白念珠菌抗体384可变区基因的载体pMDT-V2H和pUC-VL中PCR克隆单抗384的可变区VH和VL基因,依次插入含有人免疫球蛋白к轻链恒定区基因和γ1重链恒定区基因的真核表达载体pMH-CA.经DNA序列测定正确后,电穿孔转染J558L细胞进行嵌合抗体表达,RT-PCR,ELISA方法对抗体表达进行鉴定.结果 成功构建了抗白念珠菌人鼠嵌合抗体,转染真核细胞后RT-PCR显示人鼠嵌合抗体重链和轻链mRNA的转录,ELISA证实了抗白念珠菌人鼠嵌合抗体的表达以及对白念珠菌的识别.结论 成功构建抗白念珠菌人鼠嵌合抗体的真核表达载体,并表达出具有结合活性的基因工程抗体.
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抗体库技术
基因工程抗体可称为第三代抗体,其较前两代抗体有免疫原性低,用途多样等优点.其中抗体库技术又较另两种基因工程抗体(嵌合抗体,改型抗体)优越,可不经免疫制备抗体,又可实现完全人源化,理论上若构建出有足够库容量及多样性的抗体库,便可从中筛选任何抗原的单克隆抗体.该技术有可能取代杂交瘤技术.本文综述了抗体库技术的产生,发展,优点及应用前景等.
