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戊型肝炎病毒通用性PCR引物的设计及其基因分型的研究
针对戊型肝炎病毒(IEV)基因分型尚无统一标准的现状,本研究通过分析GenBank中现有的82株HEV基因组全序列,设计一组HEV通用性PCR引物(HEVuPrimer)用于扩增不同基因型HEV可测序长片段,分别基于全基因序列、HEVuPrimer扩增序列和较常用的MXJ引物扩增序列对82株HEV进行基因分型,再以HEVuPrim-er扩增1～4型HEV参考株和HEV IgM抗体阳性的临床标本,进行HEV基因分型的研究.研究结果表明HE-VuPrimer扩增区段与全基因序列对82株HEV的基因分型结果完全一致;HEVuPrimer与HEV序列的匹配程度明显高于MXJ引物,且HEVuPrimer区段的基因分型结果较MXJ区段的更为准确.HEVuPrimer可同时扩增出不同基因型HEV基因片段.124份临床标本中,60份测出特异性HEV RNA,阳性率为48.4%,基因分型结果均为4型HEV,但分属于4个不同的基因亚型,核苷酸同源性为80.O%～99.9%,其中有6例近期分离的HEV毒株形成一新的基因亚型.因此,基于HEVuPrimer扩增区段的HEV基因分型方法具有较高的可靠性和可信度,为建立统一、可行的HEV基因分型标准提供了新的思路.
关键词： 戊型肝炎病毒 基因分型 通用性引物 逆转录-套式聚合酶链反应 -
通用引物策略提高Adeno-XTM腺病毒表达系统中连接克隆的筛选效率
AdEasy是目前应用广泛的腺病毒构建系统,其采用细菌Escherichia coli(BJ5183)进行同源重组,虽然提高了效率,但需进行电击转染和阳性克隆筛选.ClonTech 公司的Adeno-XTM腺病毒表达系统采用归位内切酶(I-Ceu Ⅰ和PI-Sce Ⅰ),将穿梭质粒pShuttle-Vector上的目的基因直接连接到病毒骨架质粒上,省去了重组克隆的筛选,缩短了构建时间.
关键词： Adeno-XTM腺病毒表达系统 通用性引物 引物设计 克隆
