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戊型肝炎病毒通用性PCR引物的设计及其基因分型的研究
针对戊型肝炎病毒(IEV)基因分型尚无统一标准的现状,本研究通过分析GenBank中现有的82株HEV基因组全序列,设计一组HEV通用性PCR引物(HEVuPrimer)用于扩增不同基因型HEV可测序长片段,分别基于全基因序列、HEVuPrimer扩增序列和较常用的MXJ引物扩增序列对82株HEV进行基因分型,再以HEVuPrim-er扩增1~4型HEV参考株和HEV IgM抗体阳性的临床标本,进行HEV基因分型的研究.研究结果表明HE-VuPrimer扩增区段与全基因序列对82株HEV的基因分型结果完全一致;HEVuPrimer与HEV序列的匹配程度明显高于MXJ引物,且HEVuPrimer区段的基因分型结果较MXJ区段的更为准确.HEVuPrimer可同时扩增出不同基因型HEV基因片段.124份临床标本中,60份测出特异性HEV RNA,阳性率为48.4%,基因分型结果均为4型HEV,但分属于4个不同的基因亚型,核苷酸同源性为80.O%~99.9%,其中有6例近期分离的HEV毒株形成一新的基因亚型.因此,基于HEVuPrimer扩增区段的HEV基因分型方法具有较高的可靠性和可信度,为建立统一、可行的HEV基因分型标准提供了新的思路.
关键词: 戊型肝炎病毒 基因分型 通用性引物 逆转录-套式聚合酶链反应 -
逆转录-套式PCR检测汉坦病毒感染的实验研究
目的:探讨逆转录-套式聚合酶链反应(RT-nested-PCR)检测汉坦病毒(Hantavirus,HV)感染的准确性和敏感性.方法:用RT-nested-PCR和直接免疫荧光法(direct immunofluorescence,FA)分别检测深圳市2005年肾综合征出血热宿主动物监测中捕获的鼠类中HV的感染情况.结果:在76份特异性总抗体阳性的鼠肺标本中,用RT-nested-PCR检出61份抗原阳性,而FA仅检出47份阳性.结论:RT-nested-PCR是一种比较准确的检测汉坦病毒感染的方法,其敏感性高于FA.
关键词: 汉坦病毒 逆转录-套式聚合酶链反应 直接免疫荧光法