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利用毛细管电泳-单链构象多态性快速鉴定血液感染病原菌的研究
目的 研究毛细管-单链构象多态性(capillary electrophoresis-single strand conformation polymorphism, CE-SSCP)分析技术鉴定血液感染病原菌的可行性,并建立一种快速检测病原菌的新方法.方法 选取7种常见血液感染病原菌,在其16S rRNA的保守区设计通用引物,对16S rRNA基因进行扩增,然后将PCR产物进行CE-SSCP分析,依靠CE-SSCP图谱来鉴定病原菌.结果 通用引物能够扩增出7种病原菌;CE-SSCP分析后每种菌具有不同出峰时间:大肠杆菌(3999);金黄色葡萄球菌(4082);铜绿假单胞菌(3958);表皮葡萄球菌(4063);肺炎链球菌(4055);肺炎克雷伯菌(3980);粪肠球菌(4166).结论 采用毛细管电泳-单链构象多态性分析技术可简便、快速地鉴定常见血液感染病原菌.
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3种致病菌MCSP的序列分析及其在细菌检测和鉴定中的应用
目的建立一种利用MCSP的PCR扩增产物快速检测和鉴别细菌的方法.方法分析3种致病菌MCSP序列,针对不同细菌的MCSP的冷休克域的基因序列,设计了一对通用PCR引物,直接以细菌体为模板,相同条件下同时扩增多种细菌的MCSP基因序列.结果对Touchdown PCR条件进行优化后,同时扩增出3种细菌MCSP基因序列,经过电泳和基因测序,确认PCR扩增产物即为扩增靶序列.结论具有高度同源性不同种细菌的MCSP基因片段之间存在足够的碱基差异,将细菌鉴别至种,甚至鉴别至属.与16s rRNA相比较更具有实用价值.与基因芯片技术相结合,提供了一种快速检测和鉴别诊断细菌的方法.
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PCR方法扩增性传播泌尿生殖道感染常见病原体序列的通用引物
目的 寻找能同时扩增泌尿生殖道感染常见病原菌序列的各类通用引物,为下一步设计探针进行基因芯片快速检测打下基础.方法 查询基因资料、确定靶基因序列、用clustalx1.83比对序列,分析后确定了念珠菌、细菌类、疱疹病毒类三类通用引物,引物合成后用标准序列检验.结果 三对引物均能扩增出对应的病原菌基因序列,PCR产物经测序分析,证实与预期相符.结论 根据病原微生物目标序列设计的通用引物能有效扩增相应病原菌,通用性好,特异性高.
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两组引物对无毛囊毛根的PCR-STR分型
目的了解无毛囊毛根的短扩增子引物和通用引物PCR-STR分型在法医实践中应用的可行性.方法应用5对Bulter设计的短扩增子引物D8S1179、D21S11、THO1、D16S539和VWA与其对应的STR通用引物,利用非变性PAGE,对无毛囊毛根进行PCR-STR分型的对比研究.结果短扩增子引物与通用引物对无毛囊毛根分型的正确率:D8S1179为11.4%和17.1%、D21S11为3.7%和5.9%、vWA为22.2%和33.3%、THO1为9.3%和5.6%、D16S539为0和9.2%.毛根的短扩增子引物和通用引物部分STR分型出现了干扰结果的Ladder-like背景条带.结论在对无毛囊毛根检材进行通用引物和短扩增子引物PCR-STR分型时,五个STR位点分型检测的成功率有限,还需注意Ladder-like条带的干扰.
