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检测人Ⅰ型干扰素生物学活性的新方法
为建立一种更简便、安全、有效的检测Ⅰ型干扰素(IFN)的方法,将可被Ⅰ型IFN诱导的人6-16基因启动子与表达产物容易被检测的β-半乳糖苷酶基因相连,构建成重组质粒,然后转染人羊膜传代细胞系,筛选阳性克隆,终建立了一种适用于检测Ⅰ型IFN的简便、快速、敏感、特异和重复性好的新型方法,其敏感性同标准的细胞病变抑制法相同.
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干扰素刺激反应元件Ⅰ/Ⅱ在维甲酸诱导基因G表达调控中的作用
目的 深入研究维甲酸诱导基因G(retinoic acid-induced gene G,RIG-G)启动子上所含的干扰素刺激反应元件(interferon-stimulated response elements,ISRE)对RIG-G基因表达的调控作用.方法 根据RIG-G基因启动子所包含的ISRE序列,利用定点突变技术分别构建野生型和位点突变型的报告基因质粒,然后采用报告基因转染实验检测RIG-G基因启动子中ISRE序列的功能活性.结果 研究发现单独突变RIG-G基因启动子上的ISRE Ⅱ元件不影响报告基因的表达,而单独突变ISRE Ⅰ则会对报告基因的表达产生明显的抑制作用;同时突变ISRE Ⅰ和ISRE Ⅱ元件则会使报告基因完全失去对转录因子的反应性.结论 RIG-G基因启动子所包含的ISRE Ⅰ和ISRE Ⅱ元件是诱导该基因表达的转录因子复合物的作用位点,是该基因表达的分子基础,且ISRE Ⅰ元件的作用要优先于ISRE Ⅱ.
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干扰素诱导RIG-G基因表达调控机制研究
目的 探讨α干扰素(interferonα,IFNα)调控维甲酸诱导基因(retinoic acid-induced geneG,RIGG)表达的分子机制.方法 应用http://www.gene-regulation.com网站提供的AliBaba 2.1软件对RIG-G基因的启动子区域进行分析,并采用荧光素酶报告基因转染实验和凝胶电泳迁移实验检测RIG-G基因启动子的功能活性及其对IFNα的反应性.结果 发现在RIG-G基因的启动子序列中包含2个保守的干扰素刺激反应元件(IFN-stimulated response elements,ISREs).转录因子STAT1蛋白(signaltransducer and activator of transcription 1)能够与这两个反应元件ISRE Ⅰ和ISREⅡ相互结合.此外,在HT1080细胞中,与空载pXP2报告基因相比,含有ISRE Ⅰ和ISREⅡ的pXP2-A报告基因表现出很强的基础活性(1741.2±517.5),且这种活性还可被IFNα增强3～4倍(5338.7±1226.9,P＜0.05).而在STAT1缺陷的U3A细胞中,pXP2-A报告基因的活性则被明显消弱(从1741.2±517.5降到406.1±103.2,P＜0.05),加入IFNα也不能使其加强,表明STAT1蛋白是ISRE Ⅰ和ISREⅡ发挥活性所必需的.结论 RIG-G基因启动子所包含的ISREs是IFNα诱导RIG-G基因表达的分子基础,RIG-G是一个受STAT1蛋白直接调控的靶基因,在IFNα的信号转导途径中发挥着重要的作用.
