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拼接信号序列单碱基变异提高马传染性贫血病毒mRNA拼接效率
分别以马传染性贫血(马传贫)驴强毒(D-A EIAV)RNA和马传贫驴白细胞弱毒疫苗(DLA EIAV)RNA为模板,利用RT-PC R的方法,克隆到马传贫强、弱毒株基因组外显子-2及其下游的核苷酸序列 .然后将报告基因CAT插入到EIAV内含子2 env阅读框架中,构成 CAT拼接报告系统.同时在强毒株重组表达质粒的基础上,将其外显子-3 上游拼接受体位点的核苷酸序列CAG突变为弱毒株相应位置的核苷酸序列T AG,得到强毒单核苷酸突变株重组表达质粒.用构建的3个重组表达质粒D NA转染驴血白细胞,ELISA检测转染细胞CAT浓度.结果表明:EI AV强毒株重组表达质粒中CAT蛋白表达量高,EIAV强毒株重组表达质粒次之,EIAV强毒突变株重组表达质粒低.由于CAT基因被插入于各重组质粒中的EIAV内含子-2里,EIAV外显子-2、3之间的拼接可导致该基因的删除,因而其拼接效率低于EIAV mRNA外显子-2、 3之间的拼接效率.实验数据表明,EIAV SA2拼接信号序列单碱基变异提高了SD2-SA2拼接效率;D-A EIAV SA2-SD2拼接效率比DLA EIAV相应位点拼接效率高.
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以病毒RNA核转运为靶点的抗HIV-1药物筛选模型的建立及应用
目前.临床使用的抗AIDS一线药物主要是HIV逆转录酶抑制剂和蛋白质酶抑制剂.但是,由于这类药物价格昂贵、严重的副作用、毒性、耐药性等问题U益严重,发展新作用机制的抗HIV-1药物已成当务之急.因此,本课题以HIV-1病毒RNA核转运关键蛋白Rev为靶点,建立了新型抗HIV药物筛选模型,以期寻找具有新作用机制的抗病毒药物.在筛选模型中,选择了由HIV-1病毒偏爱性密码子所编码的GFP(GFP_(HIV))作为报告基因,用于快速简便地分析样品对Rev依赖的RNA核转运的影响.选取抑制剂来普霉索B作为模型的阳性对照对本模型进行了初步评价,计算出Z'因子为0.822 0.上述结果初步证明了该模型可用于新型抗HIV药物的筛选.对3 000个化合物进行初筛,阳性率为9.3%,复筛阳性率为7.3%.通过抗病毒活性的测定实验以及对阳性化合物进行免疫印迹检测,后发现IMB7C7这个化合物以病毒RNA核转运为靶点,是具有较好效果的特异性抑制剂.
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HIV-1 Rev蛋白及相关抑制剂
病毒颗粒蛋白表达调节因子(regulator of virion protein expression,Rev)是人免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)转录过程中不可缺少的调控蛋白.Rev与病毒mRNA的Rev应答元件(Rev response element,RRE)相互作用,加速mRNA向核外转运.Rev缺乏或者不能进入细胞核,未剪接和部分剪接的mRNA将在核内完全降解,导致HIV-1的复制被阻断.Rev在HIV-1复制周期中起着重要的反式调节作用,是艾滋病药物研究的新靶点之一.本文综述了Rev蛋白的结构、功能以及针对Rev-RRE作用机制的相关抑制剂的研究进展.
