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RT-PCR-RFLP在大麦黄矮病毒检测中的应用
黄症病毒属(Luteovirus)包括大麦黄矮病毒(BYDV)Ⅰ组病毒3种、Ⅱ组病毒13种和暂定名病毒14种.早期BYDVs的鉴定与分类是根据蚜虫传毒专化性、寄主范围、组织病理学和交互保护进行的.随着高效价抗血清的获得和分子技术的发展,病毒的血清学特性、RT-PCR、核酸杂交和序列比较等手段逐渐用于BYDVs的分类,并用于研究黄症病毒组各成员间的关系.1991年,Robertson等根据当时积累的Luteovirus序列资料,首次设计合成了Luteovirus通用引物,并在BYDVs中建立了RT-PCR-RFLP技术体系[1].随后,大量Luteovirus成员的基因组全序列和外壳蛋白基因序列得到了测定[2-6].这些序列资料的进一步积累,使得原先设计的Luteovirus通用引物的适用性受到了挑战.为此,本研究重新对这些序列资料进行了收集和分析,改进合成了新的Luteovirus通用引物,并以此为基础,在BYDVs中建立了RT-PCR-RFLP实验方法.
关键词： 大麦黄矮病毒(BYDVs) 通用引物 RT-PCR-RFLP -
RT-PCR-RFLP技术在登革病毒感染早期诊断中的应用
目的 建立疑似登革病毒感染的病原快速鉴定分型方法,并对2004年我院收治的一例疑似登革感染患者进行确诊.方法 用免疫层析法(ICT)检测DV-IgM抗体、免疫斑点法(DIBA)检测DV-IgG抗体对疑似登革病毒感染患者进行动态监测;用登革病毒通用引物通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增患者血清中的登革病毒核酸,用限制性内切酶BstnⅠ酶切,聚丙烯酰胺凝胶电泳分析鉴定分型.结果 发病第5天患者DV-IgM抗体开始呈弱阳性,第9天DV-IgM抗体滴度达到1:8,第13天DV-IgM抗体滴度开始下降;发病第9天患者DV-IgG抗体呈弱阳性,第12天DV-IgG抗体滴度达到1:8.用RT-PCR-RFLP检测疑似登革病毒感染患者早期血标本,确定2004年我院收治的一例患者为登革Ⅰ型病毒感染所致.结论 利用RT-PCR-RFLP技术对登革病毒进行分型鉴定具有敏感、特异、快速的优点,与登革热抗体检测结合起来应用可缩短疑似登革感染的确诊时间、降低检测成本,具有很好的社会效益和经济效益.
关键词： 登革病毒 免疫层析法 免疫斑点法 RT-PCR-RFLP -
长沙市2013-2014年麻疹野毒株与疫苗株的快速鉴定与分析
目的 了解2013-2014年长沙地区是否存在疫苗株感染,建立实验室快速鉴别麻疹野毒株与疫苗株方法.方法 按照《全国麻疹监测方案》,采集麻疹疑似病例咽拭子标本,应用RT-PCR方法进行麻疹病毒核酸检测,再从麻疹病毒核酸阳性病例的咽拭子标本中提取核酸,采用转录-聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(reverse transcription-polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,RT-PCR-RFLP)方法进行疫苗株和野毒株的快速鉴定和基因序列分析.结果 共采集到697份麻疹疑似病例的咽拭子标本,检出224份麻疹病毒核酸阳性,9例出现麻疹临床症状的患者有麻疹减毒活疫苗(measles attenuated live vaccine,MV)接种史.经RT-PCR-RFLP方法鉴定,均为野毒株感染.测序及序列比对分析结果显示均为H1a基因型.结论 2013-2014年长沙麻疹疑似症状者及9例MV接种史患者均为野毒株感染.成功建立RT-PCR-RFLP方法区别疫苗株与野毒株的感染.
关键词： 麻疹 野毒株 疫苗株 RT-PCR-RFLP
