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MV-S191文献资料
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麻疹病毒沪191株反向遗传系统的建立
建立麻疹病毒沪191株(MV-S191)反向遗传系统.提取MV-S191的RNA,RT-PCR分7段扩增出麻疹病毒反基因组cDNA,通过酶切、连接,拼接出MV-S191全长反基因组,并分别在其3'端和5'端引入丁型肝炎病毒核酶序列(HdvRZ)和锤头核酸酶序列(HamRZ),克隆到pT7-MCS载体,获得pT7MVs191.在MV-S191的P-M基因间区域插入绿色荧光蛋白(GFP),获得pT7MVs191-ATU-GFP,同时构建表达麻疹病毒核蛋白(N)、磷蛋白(P)和大蛋白(L)的3个辅助质粒.将pT7MVs191、pT7MVs191-ATU-GFP分别与辅助质粒通过脂质体介导共转染BSRT7细胞,热休克3h.转染3d后,取上清,感染Vero-SLAM细胞.经RT-PCR、显微镜检测绿色荧光蛋白表达及合胞体形成,在该系统中成功拯救到两种有感染活性的病毒.成功建立了MV-S191的反向遗传系统,为以麻疹病毒为载体进行新疫苗的研发奠定了基础.
关键词： MV-S191 反向遗传 T7 RNA聚合酶 绿色荧光蛋白(GFP)
