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TWS119对人NK细胞增殖和杀伤甲状腺癌BCPAP细胞的影响
目的 探讨糖原合酶激酶-3β抑制剂TWS119对NK细胞增殖和杀伤功能的影响.方法 从健康人外周血中分离单个核细胞(PBMCs),加入到NK完全培养基培养,分别于第1d和第7d时,加入TWS119 (0 ～8.0μmol/L)诱导培养.培养10 d后,用CCK-8法测定NK细胞增殖和杀伤甲状腺癌BCPAP细胞的能力;采用流式细胞术检测各组NK细胞纯度、颗粒酶和穿孔素的表达.结果 培养10d后,第1天加入TWS119诱导组对NK细胞纯度和增殖呈现抑制作用;而第7天加入在一定浓度范围的TWS119诱导培养时能促进NK细胞的增殖和杀伤指标穿孔素的表达及对甲状腺癌BCPAP细胞的体外杀伤活性.结论 TWS119在一定浓度范围能促进γδT细胞增殖和增强对甲状腺癌BCPAP细胞的杀伤功能.
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糖原合酶激酶-3β抑制剂TWS119对γδT细胞增殖及表型的影响
目的：：观察糖原合酶激酶-3β抑制剂4,6-二取代吡咯并嘧啶(TWS119)对γδT细胞增殖和表型的影响。方法：从健康人外周血中分离单个核细胞,加入到γδT细胞完全培养基培养,分别于第1天和第8天时,加入TWS119(0~8．0μmol/L)诱导培养。培养到12 d后,用CCK-8法测定γδT细胞增殖能力；用流式细胞术检测γδT细胞纯度、CD45RA和CD62L的表达。结果：TWS119能够活化γδT细胞Wnt/β-catenin信号通路。在第1天加入TWS119诱导培养组中,随着TWS119浓度的增加,γδT细胞表面 CD45RA和 CD62L的阳性表达率逐渐升高,而对细胞的增殖及纯度呈抑制作用。在第8天加入TWS119诱导培养组中,TWS119能剂量依赖性促进CD62L的表达而对CD45RA表达无影响,同时在一定浓度范围能促进γδT细胞的增殖和提高纯度的作用。结论：TWS119在一定浓度范围内能促进γδT细胞增殖和提高γδT细胞纯度,并能活化γδT细胞Wnt/β-catenin信号通获得CD45RA+CD62L+γδT细胞和CD62L+γδT细胞。
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TWS119通过抑制STAT3磷酸化促进γδT细胞CCR5的表达
目的：研究糖原合酶激酶-3β抑制剂4，6-二取代吡咯并嘧啶（TWS119)促进γδT细胞趋化因子受体CCR5表达的分子机制。方法：用TWS119诱导从健康人外周血中分离培养获得γδT细胞48 h后，用流式细胞仪检测γδT细胞CCR5的表达；Western blot检测GAPDH和p-STAT3的表达。结果：培养10 d后的γδT细胞纯度达到85．79%±5．01%。 TWS119浓度在0~8．0μmol/L范围内能显著促进趋化因子受体CCR5的表达，且剂量依赖性抑制STAT3的磷酸化。同时，用STAT3磷酸化抑制剂Stattic （0．5μmol/L)预处理γδT细胞也可以促进CCR5的表达，并能协同增强TWS119促进趋化因子受体CCR5的表达。结论：TWS119通过抑制STAT3磷酸化促进γδT细胞CCR5的表达。
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糖原合酶激酶3β抑制剂TWS119激活NK细胞Wnt/β-catenin信号通路促进CD62L表达
目的 探讨糖原合酶激酶3β抑制剂4,6-二取代吡咯并嘧啶(TWS119)调控Wnt/β-catenin信号通路对NK细胞增殖和表型的影响.方法 分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),加入到含重组人IL-2和人AB血清的NK细胞完全培养基中诱导培养,获得NK细胞.(0～ 8.0) μmol/L TWS119处理NK细胞72 h,Western blot法检测NK细胞β-catenin的表达、CCK-8法测定NK细胞增殖能力;流式细胞术检测各组NK细胞CD107a和CD62L(L-选择素)的表达.结果 培养10 d后的NK细胞纯度达到(61.76±3.74)％;TWS119能够活化NK细胞Wnt/β-catenin信号通路.(0～2.0) μmol/L TWS119处理NK细胞,能显著促进NK细胞增殖,浓度大于2.0 μmol/L时增殖率逐渐降低.(0～8.0) μmol/L TWS119处理NK细胞,CD62L的阳性表达率逐渐升高,且呈剂量依赖性;与之相反,CD107a阳性表达率逐渐下降.结论 TWS119活化NK细胞Wnt/β-catenin信号通路可获得早期成熟的CD62L+ NK细胞.
关键词： Wnt/β-catenin信号 NK细胞 TWS119 表型
