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P38激酶介导胆红素诱导的SHSY5Y细胞凋亡
观察P38激酶在胆红素诱导神经细胞凋亡中的作用,探讨参与此过程的信号转导通路.将胆红素(2×10-2g/L)直接作用于体外培养的人神经母细胞瘤细胞系SHSY5Y,利用Hochest33258染色在荧光显微镜下观察细胞核的形态是否发生凋亡样改变;用P38激酶抑制剂SB203580预处理细胞后,在倒置光显微镜下观察胆红素作用不同时间细胞形态的变化及存活情况;利用流式细胞仪检测细胞凋亡率的改变.结果显示SHSY5Y细胞经胆红素作用后细胞核出现典型的凋亡样改变;细胞经SB203580预处理1h,胆红素作用3h后凋亡率为(12.1±2.4)%,对照组为(19.4±2.7)%;4h后凋亡率为(39.3±4.8)%,对照组为(66.2±5.2)%,差异有显著性意义(P＜0.01).提示P38激酶参与了胆红素诱导SHSY5Y细胞凋亡的信号转导过程.
关键词： 胆红素 P38激酶 凋亡 人神经母细胞瘤细胞系 -
短暂激活c-jun N-terminal激酶抑制胆红素诱导的SH-SY5Y细胞凋亡
探讨c-jun N-terminal激酶(JNK)在胆红素诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡信号转导中的作用.我们用300μmol/LH2O2预处理SH-SY5Y细胞1h以激活JNK,与经PBS预处理的对照组比较,流式细胞仪结果显示凋亡细胞百分比由(37.4±3.2)%降低到(12.6±2.6)%.为了进一步证实JNK的作用,在SH-SY5Y细胞经H2O2预处理前,先经20μmol/LJNK/c-jun/APl抑制剂curcumin作用12h以抑制H2O2对JNK的激活,流式细胞仪结果显示凋亡细胞增高到(42.8±4.4)%,curcumin完全抑制了短暂激活JNK所提供的保护作用.结果表明短暂激活JNK可能在胆红素诱导的SH-SY5Y细胞凋亡中提供抗凋亡信号,提示激活JNK可保护神经细胞.
关键词： 胆红素 JNK 凋亡 人神经母细胞瘤细胞系 -
莫诺苷抑制过氧化氢诱导的SH-SY5Y神经细胞凋亡
目的 研究莫诺苷抑制过氧化氢诱导的神经细胞凋亡作用和机制.方法 培养的人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞加入莫诺苷1 μmol/L、10/μmol/L、100 μmol/L预孵育24 h,加入H2O2 300～500μmol/L作用18 h,检测神经细胞丙二醛(MDA)、线粒体膜电位(MMP)、细胞凋亡.结果 1 μmol/L、10 μmol/L、100 μmol/L莫诺苷显著抑制丙二醛增加,降低细胞膜电位,抑制细胞凋亡.结论 莫诺苷能够通过抑制H2O2诱导的SH-SY5Y神经细胞脂质过氧化,降低细胞膜电位来抑制细胞凋亡.
关键词： 莫诺苷 人神经母细胞瘤细胞系 脂质过氧化 线粒体膜电位(MMP) 细胞凋亡 -
神经型尼古丁受体α3亚单位及丝裂原活化蛋白激酶信号通路在氟暴露神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y中的表达
目的 观察神经型尼古丁受体α3亚单位(α3nAChR)及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p38激酶在氟暴露神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y中的表达,探讨过量氟暴露对细胞形成损害的信号传递机制.方法 以α3nAChR基因沉默的SH-SY5Y细胞作为α3nAChR沉默组,以正常SH-SY5Y细胞作为对照组,采用蛋白印迹法和实时荧光定量PCR法检测α3nAChR基因沉默效果.分别用0.000、0.005、0.050、0.500、1.000、2.500、5.000 mmol/L氟化钠(NaF)处理正常SH-SY5Y细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率,筛选染氟安全浓度.根据染氟安全浓度筛选结果,选择4.000 mmol/L NaF处理α3nAChR沉默组和对照组SH-SY5Y细胞0、4、8、12、24、36、48 h,用蛋白印迹法检测细胞中ERK1/2、JNK、p38蛋白表达.结果 基因沉默效果检测结果显示,在α3nAChR沉默组,α3nAChRmRNA(0.04±0.03)和蛋白(12.0±2.5)表达明显低于对照组(1.00±0.11、100.0±11.3,t=24.58、28.80,P均＜ 0.05).筛选染氟安全浓度结果显示,在染氟5.000 mmol/L组,SH-SY5Y细胞存活率(0.53±0.15)明显低于0.000 mmol/L组(1.05±0.05,P＜0.05),而其他染氟剂量组未见明显改变(P均＞0.05).随着染氟时间延长,α3nAChR沉默组和对照组磷酸化ERK1/2表达逐渐升高,其中24、36、48 h(188.33±7.33、200.00±10.01、213.33±11.55,125.33±5.69、136.00±4.52、155.33±6.51)与同组0 h(100.00±0.00、100.00±0.00)比较,差异有统计学意义(P均＜ 0.05),且24、36、48 h α3nAChR沉默组明显高于对照组(t=9.26、7.63、5.72,P均＜0.05).随着染氟时间延长,α3nAChR沉默组和对照组磷酸化JNK表达逐渐升高,其中12、24、36、48 h α3nAChR沉默组(154.00±6.25、149.00±5.57、156.00±6.08、141.67±2.52)和8、12、24、36、48 h对照组(133.33±10.69、173.00±4.00、175.00±11.79、200.67±11.93、200.33±18.58)与同组0 h(100.00±0.00、100.00±0.00)比较,差异有统计学意义(P均＜ 0.05),且8、12、24、36、48 h α3nAChR沉默组明显低于对照组(t=-428、-5.02、-2.89、-8.33、-6.18,P均＜0.05).24、36、48 h对照组磷酸化p38激酶表达(120.33±4.51、122.00±7.55、119.67±7.57)明显高于0h(100.00±0.00,P均＜0.05),且高于同时间点α3nAChR沉默组(93.33±9.61、94.00±5.01、98.33±5.69,t=-4.01、-6.73、-5.59,P均＜0.05).两组细胞中总ERK1/2、总JNK、总p38激酶表达随染氟时间延长未见明显改变(P均＞ 0.05).结论 在过量氟暴露条件下,ERK1/2信号通路的激活不完全依赖于α3nAChR的表达;而JNK和p38两条通路的激活在一定程度上依赖于α3nAChR.
关键词： 神经型尼古丁受体 丝裂原活化蛋白激酶 人神经母细胞瘤细胞系 -
自杀基因治疗裸鼠神经母细胞瘤的实验研究
1998年世界肿瘤会议公推自杀基因疗法是治疗肿瘤有希望,有前途的方法.但是目前国内未见HSV-tk/GCV体系临床治疗神经母细胞瘤的报道.为了探讨HSV-tk/GCV体系治疗神经母细胞瘤的可能性,本研究将含有hytk基因的真核表达载体LXpsp-hytk,以脂质体Lipofectin介导,转染人神经母细胞瘤细胞系SY5Y,用潮霉素B进行筛选,获得了阳性克隆,并在体外能够稳定传代.利用筛选出来的阳性细胞SY5Y-hytk,探讨了HSV-tk/GCV体系对神经母细胞瘤裸鼠的治疗作用,取得了良好的效果,现报道如下.
