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Hu蛋白作为豚鼠小肠肌间丛神经元标志物的研究
比较5种神经元标志物在小肠肌间丛神经元中的特异性.应用新发现的神经元标志物Hu蛋白,对豚鼠肠神经系统(ENS)的小肠肌间丛神经元进行免疫荧光染色研究,并与其他神经元标志物MAP-2,PGP 9.5,NSE,TUJ-1进行比较.结果表明:Hu蛋白主要分布于神经元胞浆中,神经元核也有较浅的染色,尤其在whole-mount上,每个神经元都清晰可见.MAP-2作为神经元标志物,也能显示完好的细胞形态,但由于粗大神经纤维的强染色,使神经元计数不准确.PGP 9.5,NSE和TUJ-1对体外培养的小肠肌间丛神经元染色良好,但在whole-mount上,神经纤维强染色,无法计数分析.结果提示在豚鼠肠神经系统小肠肌间丛神经元的计数研究中,Hu蛋白是理想的神经元标志物.
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抗HU蛋白抗体抑制金黄色葡萄球菌生物膜形成实验
目的 探讨靶向金黄色葡萄球菌DNA结合蛋白HU的多克隆抗体是否能够抑制生物膜的形成.方法 以金黄色葡萄球菌NCTC-8325基因组为模板,PCR扩增HU基因,构建重组表达载体pET-28a-HU,亚克隆至大肠埃希菌BL21(DE3),利用IPTG诱导表达,通过镍亲和树脂纯化获得HU蛋白.利用多克隆抗体制备技术获得兔源抗HU血清,利用ProteinA树脂纯化多克隆抗体,利用ELISA和Western blot实验检测抗体亲和力,并通过金黄色葡萄球菌生物膜形成实验验证抗体活性.结果 重组蛋白HU以可溶形式表达,成功制备了高滴度(＞1∶100000)的兔源抗HU多克隆抗体.生物膜形成后结晶紫染色数据显示抗HU多克隆抗体浓度在75μg/ml和0.6μg/ml时OD595读值分别为0.052和1.220,Confocal实验表明抗HU多克隆抗体能够明显抑制金黄色葡萄球菌生物的形成,且呈浓度依赖性.结论 靶向金黄色葡萄球菌HU蛋白的多克隆抗体能够抑制金黄色葡萄球菌生物膜的形成,这可能成为一种新的治疗金黄色葡萄球菌感染策略.
