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IRF1对M1巨噬细胞极化及其抗肿瘤效应的影响
目的:研究IRF1对M1巨噬细胞极化及M1介导的抗肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法构建单核细胞U937来源M1巨噬细胞模型(U937-M1),将细胞分为4组:用PMA诱导的未活化巨噬细胞组(M0),用PMA,IFN-γ和LPS处理的M1型巨噬细胞组(M1),用siRNA干扰IRF1的M1型巨噬细胞组(siIRF1)以及阴性干扰的M1型巨噬细胞组(siC)。用流式细胞术检测M1/M2特异表面标志物CD86/CD206的表达;qPCR检测M1/M2相关基因(IL-12p35,IL-12p40,IL-23p19,IL-6, TNF-α/IL-10)及IFNB1的表达;ELISA检测IL-12p70,IL-10及IFN-β的表达;Western blot 检测IRF1及IRF5的表达;CCK8和流式细胞术分别检测HepG2及SMMC-7721增殖和凋亡。结果与U937-M1组相比,干扰IRF的M1组CD86表达降低,但CD206升高(P<0.05);mRNA水平上,IL-12p35,IL-12p40,IL-23p19,IL-6,TNF-α以及IFNB1表达降低,但IL-10表达增高(P<0.01);蛋白水平上,IL-12p70,IFN-β及IRF5表达降低,但IL-10表达增高(P<0.05)。 IRF1干扰后,M1巨噬细胞促进肝癌细胞增殖、抑制其凋亡( P<0.05)。结论干扰IRF1后,M1巨噬细胞极化状态受损,甚至部分向M2型转变;其抗肿瘤效应转变为促肿瘤效应;且IRF1可能参与调节IFN-β与IRF5的表达。
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桂皮醛对LPS诱导的Raw264.7巨噬细胞迁移和M1极化的抑制作用研究
目的 研究桂皮醛对脂多糖(LPS)诱导的Raw264.7巨噬细胞迁移和M1极化的抑制作用.方法 培养Raw264.7巨噬细胞,随机分为空白对照组(不加LPS及药物)、LPS组(加入终浓度为20μg· L-1的LPS)、桂皮醛(0.1μmol·L-1,0.3 μmol· L-1)组.应用Transwell小室法观察桂皮醛对LPS诱导的巨噬细胞迁移的影响;应用流式细胞术观察桂皮醛对LPS诱导的巨噬细胞M1极化的影响.结果 Transwell小室迁移实验结果与流式细胞术检测结果均显示,LPS(20 ug· L-1)可明显促进RAW264.7巨噬细胞的迁移及M1极化(P<0.01);与LPS组比较,桂皮醛0.1 μmol· L-1组、桂皮醛0.3 μmol· L-1组可明显抑制LPS诱导的Raw64.7巨噬细胞的迁移和M1极化(P<0.01),且桂皮醛0.3 μmol· L-1组作用优于桂皮醛0.1 μmol· L-1组(P<0.05).结论 桂皮醛对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞的迁移和M1极化有明显抑制作用,且呈浓度依赖性.
关键词: 桂皮醛 RAW264.7巨噬细胞 迁移 M1极化