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慢性低压低氧对大鼠肺组织HIF-1ɑ、COX1蛋白及氧化应激反应的影响
目的 探讨慢性低压低氧环境对大鼠肺组织细胞色素C氧化酶1(COX1)蛋白及氧化应激反应的影响.方法将大鼠随机分为常氧组(1500 m)和低氧组(4300 m),低氧组大鼠暴露低氧30 d后采集标本.用Western blot检测肺组织COX1蛋白的表达及ELISA检测肺组织和血清HIF-1ɑ、血浆ROS、肺组织SOD和CAT酶.用生理信号采集系统测定肺动脉压(PAP).结果 在低氧组的大鼠血清和肺组织内HIF-1α蛋白显著高于常氧组(P<0.01);ROS含量显著低于常氧组(P<0.01);COX1蛋白在低氧组的大鼠肺组织中表达显著下降(P<0.01);血清总抗氧化能力升高(P<0.01).结论 高海拔对机体的影响可能是直接性的损伤,而并非仅仅是氧化应激反应所致.
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日本血吸虫和斯氏狸殖吸虫的cox1遗传多态性研究
目的 分析日本血吸虫和斯氏狸殖吸虫线粒体cox1基因的遗传多态性.方法 检获日本血吸虫和三峡库区上下游流行区斯氏狸殖吸虫样本,提取其细胞DNA,PCR特异性扩增线粒体cox1基因并测序;分别用Clusterx和DNAsis软件对两虫种线粒体cox1基因片段进行序列的变异分析和转录因子基因序列分析.结果 PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳,日本血吸虫与斯氏狸殖吸虫cox1基因片段大小分别为445 bp和418 bp.两虫种cox1基因序列有138位碱基相同,占斯氏狸殖吸虫cox1碱基的33.01%.两虫种cox1基因包含的转录因子基因序列全部相同,均为12种,18个.结论 日本血吸虫和斯氏狸殖吸虫在基因水平上存在明显差异,但在遗传进化上具有明显的相似性,从基因水平上证明了两虫种存在交叉抗原的可能性.
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广州管圆线虫线粒体COX1基因碱基置换饱和度分析
目的 检测广州管圆线虫线粒体COX1基因碱基置换饱和度. 方法 收集全国33个采样点的广州管圆线虫成虫130条,对其COX1基因全长进行PCR扩增和测序,拼接、比对后,利用DnaSP软件分析序列的碱基多样性、单倍型数量和突变位点,根据碱基颠换和碱基转换随遗传距离增加的变化趋势判断COX1基因饱和度.结果 共获得130个COX1全长序列,长度均为1 577 bp,碱基突变位点为171个,占10.8％,核苷酸多态性为0.02841.突变的空间分布无明显聚集性,均匀分布于整条DNA链上.其中单倍型39个,多态性为0.8114.单倍型两两比较发现,随遗传距离增加,广州管圆线虫的COX1基因碱基转换突变和颠换突变均呈直线上升,且转换数量多于颠换数量,增加速率分别为0.76和0.16,碱基置换未饱和;不同氨基酸密码子位点碱基置换速率差异较大,速率大的为第三位点,其次为第一位点,小的为第二位点.后圆线虫总科(Metastrongyloidea)7种线虫的COX1基因饱和度分析显示,遗传距离约为0.15时,碱基颠换数量开始超过转换数量.将本研究所获COX1基因序列与后圆线虫总科COX1基因综合分析,结果表明,碱基转换的比例在6％时出现平台期,而碱基颠换仍直线增加.结论 广州管圆线虫线粒体COX1基因碱基置换未饱和.
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广西4地带绦虫分离株COX1序列分析
目的 分析广西4地带绦虫分离株COX1序列,了解亚洲绦虫在广西的分布.方法 对鹿寨、融水、田东、三江等4县现症病人进行驱虫,收集绦虫成虫.绦虫成虫经反复洗涤后,各取孕节一节,研碎后提取基因组DNA;同时设计特异性引物,PCR扩增各分离株COX1片段,对扩增产物进行T-A克隆测序；应用相关软件分析序列的同源性、遗传距离,同时构建系统发生树.同时,从GenBank检索亚洲绦虫、猪带绦虫和牛带绦虫COX1基因序列,并与4地分离株基因序列进行比较.结果 广西4地5个带绦虫分离株的COX1碱基序列长度均为444 bp.鹿寨株与亚洲绦虫之间基因差异为5个位点(1.11％),同源性为98.87％,遗传距离为0.011,其在邻接法和简约法构建的系统发生树中位于同一分枝.融水A株与猪带绦虫同源性达100％,B株与牛带绦虫和亚洲绦虫的同源性分别达98.20％和96.17％；田东和三江分离株与猪带绦虫的同源性分别为99.55％和96.40％,遗传距离分别为0.005和0.037；鹿寨株与牛带绦虫的同源性达96.40％.结论 广西鹿寨县存在亚洲绦虫流行,融水县存在牛带绦虫和猪带绦虫混合流行.
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COX1-1676C/T及IL-1β-511C/T基因多态性与肠溶阿司匹林致冠心病患者上消化道出血的相关性
目的:探讨COX1-1676C/T及IL-1β-511C/T基因多态性与肠溶阿司匹林(ASP)致冠心病(CHD)患者上消化道出血的关系.方法:收集4组资料各100例:连续服用肠溶阿司匹林超过10d且大便潜血试验阳性[ASP+(OB+)]的CHD患者100例,按年龄、性别配对原则,收集大便潜血试验阴性ASP+ (OB-)]的CHD、未服用ASP但上消化道出血者[ASP-(OB+)]和健康对照者[ASP-(OB-)]各100例.应用PCR-RFLP方法进行COX1-1676C/T和IL-1β-511C/T基因分型,并测定服药前后ASP+ (OB+)组(42例)和ASP+(OB-)组(42例)IL-1β及血管内皮生长因子(VEGF)的含量.结果:对于COX1-1676C/T基因,ASP+OB(+)组中的T等位基因频率高于其他3组(P＜0.05),并且该组服药前后携带TT型者比其他基因型者VEGF明显下降(P＜0.05),携带T等位基因者IL-1β明显升高(P＜0.05).对于IL 1β-511C/T,OB(+)组的TT型和T等位基因频率均高于(OB-)组(P＜0.05),并且ASP+OB(+)组携带TT型者比携带其他基因型者VEGF下降明显而IL-1 β升高明显(P＜0.05).结论:COX1-1676C/TT等位基因可能是肠溶ASP致CHD患者上消化道出血的易感因素,IL-1β-511C/T突变可能是上消化道出血的易感因素；其机制可能是2个基因突变后诱导血清中IL-1β水平增加和VEGF水平降低.
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我国6个弓形虫虫株线粒体cox1部分序列的比较分析
目的 对采自我国的6个弓形虫虫株线粒体细胞色素c氧化酶第Ⅱ亚基(cox1)基因部分序列(pcox1)进行比较分析,并与RH株的相应序列进行比较,研究弓形虫线粒体cox1基因与弓形虫的种群遗传关系.方法 应用聚合酶链反应(PCR)扩增弓形虫不同虫株的pcox1,并进行序列分析比较.结果 每个虫株都获得599 bp的pcox1序列,比较分析表明,弓形虫不同虫株的pcox1序列之间没有差异.结论 弓形虫pcox1序列不能作为种群遗传变异研究的标记,也与弓形虫毒力无关.研究结果为进一步研究弓形虫的群体遗传结构奠定了一定的基础.
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广西南丹县旋毛虫COX1基因和5S rRNA基因分析
目的 分析广西壮族自治区南丹县旋毛虫(Trichinella spiralis)COX1和5SrRNA基因特点,阐述该分离株的系统发生关系及基因变异规律.方法 PCR扩增南丹旋毛虫分离株COX1和5S rRNA基因片段并对扩增产物进行测序;应用Blast和Clustal X软件计算其碱基组成,分析该分离株与GenBank中相应序列的同源性及遗传距离,同时应用UPGMA方法分析聚类关系.结果 扩增后COX1基因片段长419 bp.5S rRNA基因片段长695 bp.南丹旋毛虫分离株与Trichinella spiralis(T.spiralis)的同源性高,分别为99.0%和99.1%,遗传距离小,分别为0.005和0.014.采用UPGMA法构建的2个系统发生树,南丹分离株和T.spiralis具有高度同源性,位于同一分枝,与无囊包旋毛虫(T.papuae和T.zimbabwensis)分枝较远,后者独成一枝,与T.spiralis相比,2个基因均存在变异,且变异位点均为4个,分别占相应基因序列的1.19%和0.57%.2个基因均富含A和T碱基,A+T含量分别占相应基因的61.8%和66.4%.COX1变异存在转换和颠换,但均发生在密码子第三位点.5SrRNA基因变异位点分散,但变异均为转换,无颠换.结论 南丹旋毛虫分离株与T.spiralis具有高度的亲缘关系,其COX1和5S rRNA基因的碱基组成、变异位点及变异类型均具有偏好现象.
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中国两地旋毛虫分离株COX1序列分析
目的:分析广西南丹和河南两地旋毛虫分离株COX1序列,鉴定两地旋毛虫的虫种.方法:分别提取2个分离株基因组DNA,PCR扩增COX1片段,并对扩增产物进行T-A克隆测序;应用相关软件分析序列的同源性、遗传距离,同时构建系统发生树,并与GenBank中已知旋毛虫种相应基因序列比较.结果:我国2个旋毛虫分离株和T.spiralis的COX1序列长度相同,为419 bp;南丹和河南分离株与T.spiralis的相似度分别为99.0%和98.8%.南丹与河南分离株之间为99.8%;两地分离株与其它旋毛虫种的相似度低于90.8%.南丹和河南分离株与T.spiralis遗传距离分别为0.005、0.003.两地分离株之间的遗传距离为0.003,与其它旋毛虫的遗传距离均＞0.101.2个系统发生树中,我国2个分离株与T.spiralis 位于同一分支,自引导值分别为100和99.结论:推断广西、河南两地旋毛虫分离株均为T.spiralis.
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COX1、12SrRNA、16SrRNA基因复合扩增种属鉴定研究
目的 利用线粒体的特点构建一种特异性好、灵敏度高、稳定性好、操作简便,适用于法医学种属鉴定的复合扩增体系.方法 查找Gene bank上常见动物mt DNA序列,用序列比对软件,对人和动物序列进行分析,选出COX1、12SrRNA、16SrRNA区域.使用primer5和primer3(online)设计引物,COX1的引物有人类特异性,12SrRNA和16SrRNA的引物作为内参对照可以匹配人和大部分常见动物.收集人和恒河猴,猪、牛、羊、兔、鲈鱼、鲍鱼、鸭、鸡、狗、鼠11种动物的肌肉或血液样本,用Chelex-100法提取DNA,复合扩增COX1、12SrRNA、16SrRNA基因片段,琼脂糖凝胶电泳分离扩增产物.结果 人的样本出现三条带,分别为COX1、12 SrRNA、16SrRNA的扩增产物,大小分别为202、231、395 bp;11种动物出现两条带,分别为12SrRNA和16SrRNA的扩增产物,大小分别在230、395bp左右.复合扩增体系灵敏度为2.5pg,而特异性引物COX-1的灵敏度为10-8 pg.结论 该复合扩增体系可以明确区分人与动物,灵敏度高,可应用法医学中的种属鉴定.
