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供者特征对rhG-CSF动员的外周血和骨髓混合移植物中免疫细胞组成的影响
近,我们采用GIAC(即G,粒细胞集落刺激因子+I,强的免疫抑制+A,抗胸腺细胞球蛋白+C,外周血与骨髓联合)技术体系成功跨越了HLA不合屏障,从根本上解决了异基因造血干细胞移植(Allo-HSCT)供者来源缺乏的问题[1-2].大量资料显示,供者特征影响移植物的细胞组成,后者又与Allo-HSCT的预后密切相关[2-3].我们从供者的年龄、性别、体重等方面研究供者特征对粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员的外周血和骨髓混合移植物中免疫细胞组成的影响.
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rhG-CSF动员对供者T细胞增殖和细胞毒的影响
为了解rhG-CSF动员对供者T细胞增殖和细胞毒的影响,在rhG-CSF动员前和动员后第5天抽取供者外周血分离单个核细胞(PBMNC),在PBMNC中加入CD3单克隆抗体和rhIL-2以激活T细胞,培养96小时后检测T细胞增殖率和细胞毒性,并进一步对动员前后激活的T细胞用流式细胞术检测Fas表达率,用RT-PCR检测穿孔素(perforin)和Fas配体(FasL)mRNA表达情况,应用放射免疫分析方法检测细胞的γ干扰素(IFN-γ)分泌情况.结果发现,供者外周血T细胞增殖能力在应用rhG-CSF后下降(68.5±15.1)%(P＜0.05);动员后CD3单克隆抗体和rhIL-2激活后T细胞对K562细胞的细胞毒性均比动员前细胞有显著减弱(P＜0.05);动员前后T细胞在激活后的Fas表达率无明显差异(P＞0.10);动员前后T细胞在激活后均表达perforin mRNA,不表达FasL mRNA;动员前T细胞激活后分泌IFN-γ的能力明显高于动员后(P＜0.01).结论:rhG-CSF动员致使供者T细胞在CD3单克隆抗体与rhIL-2激活后的增殖率和细胞毒性下降.
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rhG-CSF动员的儿童自体外周血干细胞冻存后回输的毒副作用研究
本研究探讨儿童患者中冻存自体外周血造血干细胞回输的相关毒性.对35例恶性肿瘤患儿经大剂量化疗或大剂量化疗加放疗的预处理后,进行解冻后的冻存自体外周血造血干细胞分次快速回输,对70例次输注进行了毒性评定.全部病人采用化疗加重组人粒细胞刺激因子(rhG-CSF)进行动员,以CS-3000 plus型或COBE spectra-4型血细胞分离机采集外周血造血干细胞.移植物置于10%二甲亚砜(DMSO)中冷冻,并保存在液氮中.35例恶性肿瘤患儿输注总量190-420 ml(265±73 ml,相当于13.7±4.2 ml/kg),含干细胞数(4.43±1.91)×108/kg,DMSO平均输注总量0.94±0.18 g/kg.单次输注量90-300 ml(132±37 ml,相当于6.6±5.2 ml/kg),DMSO 0.68±0.12 g/kg,同时观察并记录输注过程中出现的症状,并监测输注后24小时内脉搏、血压、体温、呼吸频率,每15分钟记录1次.输注前、后检测血清钾、钠、肌酐、总胆红素、天门冬氨酸转移酶和丙氨酸转移酶及尿液检测.结果表明:回输后出现轻微相关毒性,诸如血红蛋白尿(77.1%)、头痛(40.0%)、恶心(34.3%)、呕吐(24.3%)、腹痛(11.4%)、心动过速(10.0%)、心动过缓(5.7%),但无休克等严重毒性反应.血胆红素在输注后有所升高.输注量＞200 ml的患者,其血红蛋白尿、头痛、恶心、呕吐和腹痛的发生率有升高趋势(P＜0.01),仍可迅速消失.首次输注后总胆红素有升高(P＜0.01),并观察到输注后胆红素升高程度与输注量明显相关(r=0.8977,P＜0.01).结论:冻存的儿童自体外周血造血干细胞分次回输的相关毒副作用较轻,发生率较低,头痛、恶心、呕吐的发生率与单次回输量有关.
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rhG-CSF动员健康供者CD34+细胞产率的影响因素分析
为探讨rhG-CSF动员健康供者年龄、性别等因素时采集物CD34+细胞产率的影响,分析61例健康供者外周血采集物CD34+细胞数量与自身特点的相关性,并进行多因素回归分析.以供者性别、年龄、身高、体重、体重指数(BMI)和采集时间作为研究参数,外周血采集物单核细胞计数、CD34+细胞占有核细胞百分比、CD34+细胞计数、CD34+细胞每公斤体重(供者)计数的均值作为研究变量.结果表明,供者年龄是影响CD34+细胞产率主要因素,呈中等负相关(-0.60
