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大鼠选择性运动神经元死亡的脊髓器官型培养模型的建立
利用谷氨酸转运体抑制剂苏-羟天冬氨酸(threo-hydroxyaspartate,THA)制备大鼠选择性运动神经元死亡的脊髓器官型培养模型.取出生后8天乳鼠的腰段脊髓组织切片做脊髓器官型培养,在培养液中分别加入不同浓度THA(50 μmol/L、100 μmol/L、500 μmol/L),用神经元的特异性免疫组化染色SMI-32对脊髓腹角α运动神经元及背角中间神经元计数,测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量,并与对照组做比较.结果显示对照组α运动神经元数目恒定,THA可以引起剂量依赖性的α运动神经元数目减少和培养液中LDH含量增高,其中加用THA 100 μmol/L后3周后即有α运动神经元数目较对照组明显减少,而脊髓背角的中间神经元数目无显著差异.利用谷氨酸转运体抑制剂THA 100 μmol/L可以制成选择性运动神经元损伤模型,为进一步研究肌萎缩侧索硬化(ALS)的发病机制及探讨神经保护治疗提供了有效的方法.
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谷氨酸转运抑制剂诱导脊髓运动神经元选择性损伤
目的:观察谷氨酸转运体抑制剂苏-羟天冬氨酸(THA)对器官型培养的脊髓片的影响.方法:取出生后8 d乳鼠的腰段脊髓组织切片做脊髓器官型培养,在培养液中加入THA,免疫组化染色进行神经元计数,测定培养液中谷氨酸的含量,电镜观察超微结构改变.结果:THA组随培养时间的延长谷氨酸含量增高,α运动神经元数目减少,超微结构损伤明显,而脊髓背角的中间神经元的数目无显著变化,超微结构损伤相对较轻.结论:谷氨酸转运异常可以诱导选择性运动神经元损伤.
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石杉碱甲对体外培养大鼠脊髓片前角运动神经元损伤的保护作用
目的:利用选择性运动神经元死亡的脊髓薄片培养模型,观察石杉碱甲对运动神经元的保护作用.方法:乳大鼠腰段脊髓组织薄片分为正常对照组、模型组和石杉碱甲1,10,100μmol·L-1 5组.用倒置显微镜观察脊髓片形态变化,SMI-32免疫组化染色对腹角α运动神经元记数,透射电镜观察α运动神经元的超微结构并测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量.结果:石杉碱甲100μmol·L-1组脊髓片在体外生长良好,形态与正常对照组相近;石杉碱甲1,10μmol·L-1组脊髓片生长不良,形态与模型组相近.与正常对照组相比,模型组脊髓片前角SMI-32阳性α运动神经元数减少(P＜0.05),培养液中LDH含量增加(P＜0.05).与模型组相比,石杉碱甲100μmol·L-1组脊髓片前角α运动神经元数增加(P＜0.05),胞浆内空泡明显减少,培养液中LDH含量减低(P＜0.05).结论:高浓度石杉碱甲能改善乳大鼠脊髓片前角α运动神经元生长,减少其空泡形成及死亡,并降低LDH的释放.
