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质粒纯化利用离子交换柱的再生方法
目的为提高质粒大量提取纯化柱的使用率,降低实验成本.方法用0.5 mol/L HC1和0.5 mol/L NaOH溶液处理已使用过的一次性纯化柱,使之再生,继而被重复利用.结果再生纯化柱所提纯的质粒DNA经PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳分析证实DNA纯度高,无不同质粒间污染.结论此方法操作简便、快捷,具有较高的实用价值.
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QIAGEN质粒DNA纯化柱的再生利用
1 材料和方法1.1 材料QIAGEN Plasmid Maxi kit(QIAGEN-tip 500),纯化专用试剂(P1, P2,P3,QBT,QC,QF,具体配方见QIAGEN质粒纯化手册).pcDNA3.1(-)/MSP1-19为将PCR扩增的恶性疟原虫裂 殖子表面蛋白1(MSP1)的17区基因片段(300 bp)以EcoRI和BamHI酶切位点克隆入pcDNA3.1(-) 中[2], pcDNA3.1(-)为Introgen公司的真核表达质粒. 在研究pcDNA3.1(-)/MSP1-19作为DNA 疫苗效果时,需大量纯化该质粒, 故本研究在纯化该质粒的同时, 同样用该质粒进行纯化柱再生研究.
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烟头上脱落细胞3种DNA提取方法的比较
目的 比较采用3种方法提取烟头上脱落细胞DNA的成功率,评价其应用价值.方法 91枚实际检案中积累的烟头,按过滤嘴的水松纸材质颜色分为深色(68枚)和浅色(23枚)两组;采用Chelex-100法、DNA-IQ磁珠法和骨孵化液联合QIAquick PCR纯化柱,提取烟头上的脱落细胞DNA;Identifiler-Plus试剂盒进行扩增、AB 3130xL型遗传分析仪及GeneMapper ID-X v1.2基因软件进行检测,对两组检验成功率进行比较.结果 采用Chelex-100法、磁珠法和联合纯化柱提取各组DNA的分型成功率在浅色组分别为:82.6％、91.3％和95.7％,不同方法之间比较无显著性差异(P＞0.25);深色组分别为:60.3％、29.4％和91.2％,不同方法之间比较有显著性差异(P＜0.01).结论 本文3种方法中,骨孵化液联合QIAquick PCR纯化柱方法更能适应不同材质过滤嘴外层纸上脱落细胞的DNA提取,可在相关检验中选择使用.
