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奥替普拉和反义GST-π对恶性转化细胞凋亡影响的研究
目的探索奥替普拉(oltipraz)和反义GST-π在诱导恶性转化细胞凋亡中的作用. 方法利用逆转录病毒载体pDORneo构建GST-π重组质粒pDGSTas,用Lipofectin将反义GST-πRNA导入转化的恶性Rat-1细胞(T-Rat-1),经G418筛选获得反义转染的Rat-1细胞(AT-Rat-1);再用oltipraz分别作用于正常的Rat-1、T-Rat-1和AT-Rat-1;细胞凋亡状况用流式细胞仪和DNA凝胶电泳分析. 结果 ELISA分析显示AT-Rat-1细胞的GST-π蛋白含量比T-Rat-1细胞降低;筛选多个剂量后发现oltipraz在130～140mg/L,范围能明显诱导AT-Rat-1细胞凋亡.同时用Northern Blot检查发现AT-Rat-1细胞的c-fos mRNA表达水平高于正常Rat-1细胞和T-Rat-1细胞. 结论 oltiprz在适当浓度时能诱导AT-Rat-1细胞凋亡;GST-π的低表达和c-fos基因的高表达与AT-Rat-1细胞凋亡相关.
关键词： 奥替普拉 凋亡 谷胱甘肽-硫-转移酶 -
重组日本血吸虫谷胱甘肽-硫-转移酶单克隆抗体在急性血吸虫病临床诊断中的应用
目的 研究重组抗原26 ku日本血吸虫谷胱甘肽-硫-转移酶(SjGST)及其单克隆抗体在血吸虫患者分子诊断中的应用.方法 用已纯化的重组SjGST抗原免疫近交系(BALB/c)小鼠,数周后取免疫鼠脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,选择性培养基筛选出杂交瘤细胞,经有限稀释法克隆化,扩大培养制备针对重组SjGST抗原的单克隆抗体细胞株.亲和层析法纯化单克隆抗体.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测急性血吸虫病患者和非流行区正常人血清.结果 成功获得重组蛋白26 ku SjGST,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示与预期相对分子质量大小相符的蛋白条带.成功获得能够长期分泌抗重组SjGST单克隆抗体的杂交瘤细胞株,ELISA与蛋白质印迹试验均显示杂交瘤细胞培养上清中含有重组SjGST抗体.EIASA检测患者血清结果 表明,26 ku SjGST用于急性血吸虫病患者血清中抗体检测的阳性率为90.6%,26 ku SjGST抗体用于急性血吸虫病患者血清中循环抗原检测的阳性率为59.4%.结论 该重组蛋白用于急性血吸虫病患者血清中抗体的检测具有良好的免疫反应性,26 ku SjGST抗体对循环抗原的检测可作为抗体检测的有效补充.
关键词： 谷胱甘肽-硫-转移酶 单克隆抗体 日本血吸虫 免疫学诊断
