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不同年龄大鼠斜角带核水平支神经元内TrkA和ChAT的表达--免疫组织化学研究
目的了解大鼠基底前脑斜角带核水平支神经元内酪氨酸激酶A(tyrosine kinase A,TrkA)、胆碱乙酰化转移酶(choline acetyltransferase,ChAT)样阳性神经元的生后发育规律及两者的相互关系.方法用免疫组织化学方法结合图像分析仪检测大鼠基底前脑斜角带核水平支TrkA、ChAT样阳性神经元的数量、面积和灰度值.结果TrkA、ChAT分布于基底前脑神经元.生后1d可见TrkA表达,但生后5d才出现ChAT表达.生后20dTrkA、ChAT表达至高峰;生后30d下调,成年时维持相对较高水平.老年鼠TrkA、ChAT样阳性神经元出现萎缩、数量也分别减少39.7%、33.3%;胞体平均面积分别减少15.7%、12.8%;平均灰度值分别减少29.9%、9.9%.同时,不同年龄大鼠TrkA、ChAT样阳性神经元截面积和灰度呈弱正相关,数量呈正相关.结论大鼠基底前脑斜角带核水平支神经元TrkA表达早于ChAT表达.从生后5d起,TrkA、ChAT表达有相似的时间模式.TrkA可能参与斜角带核胆碱能神经元的发育、分化、成熟和老化.老年鼠TrkA、ChAT表达下调可能是老年动物和阿尔茨海默病人基底前脑胆碱能神经元变性的易感性增加的原因之一.
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穹窿海马伞切断大鼠不同脑区胆碱乙酰化转移酶表达的变化
背景:胆碱乙酰化转移酶是乙酰胆碱合成的关键酶,是胆碱能神经系统功能活动的重要标志.胆碱能神经系统损伤与阿尔茨海默病和轻度认知功能障碍的病理过程有关.穹隆-海马伞切断是否影响大鼠脑内不同部位(皮质区、海马CA1区、杏仁复合体区、Meynert核区)胆碱乙酰化转移酶表达的变化,对于了解阿尔茨海默病和轻度认知障碍的病理过程和建立实验性阿尔茨海默病动物模型具有重要意义.目的:观察双侧穹窿海马伞切断对大鼠脑内胆碱乙酰化转移酶表达的影响,探讨模拟实验性阿尔茨海默病的方法.设计:随机对照动物实验.单位:青岛大学医学院附属医院脑血管病研究所和济宁市第一人民医院神经内科.材料:实验于2003-03/12在青岛大学医学院附属医院脑血管病研究所完成.实验动物选择成年健康雌性Wistar大鼠14只,5月龄,随机分为模型组和对照组,每组7只.方法:①制作大鼠双侧穹窿海马伞切断模型(模型组),动物麻醉固定于脑立体定位仪后,参照Paxinos和Watson大鼠脑立体定位图谱于前囟后2.2～2.5 mm,中线外1 mm处凿开颅骨,切开硬脑膜,自制双刃刀完全切断海马伞外侧缘.对照组除不切断穹窿海马伞外,其余步骤同模型组.②常规饲养28 d后处死大鼠,取脑组织制作石蜡冠状切片,行胆碱乙酰化转移酶免疫细胞化学染色,观察两组大鼠皮质区、海马CA1区、杏仁复合体区、基底前脑Meynert核区胆碱乙酰化转移酶阳性细胞数.光镜下见棕褐色细胞为胆碱乙酰化转移酶阳性细胞.主要观察指标:观察两组大鼠皮质区、海马CA1区、杏仁复合体区、基底前脑Meynert核区胆碱乙酰化转移酶阳性细胞数.结果:实验过程中无动物死亡,全部进入结果分析.模型组大鼠大脑皮质区、海马CA1区、杏仁复合体区、Meynert核区胆碱乙酰化转移酶表达的阳性细胞数与对照组比较显著减少,差异有显著性.[(2.97±1.45),(32.60±7.33)个,t=10.51,P＜0.01];[(6.83±2.41),(50.57±5.85)个,t=18.30,P＜0.01];[(14.43±6.75),(35.43±10.49)个,t=4.47,P＜0.01];[(5.77±6.62),(48.77±7.10)个,t=11.72,P＜0.01].结论:穹窿海马伞切断可致大鼠脑内多部位胆碱乙酰化转移酶表达减少,与阿尔茨海默病和轻度认知功能障碍病变过程有关,这种方法可作为模拟实验性阿尔茨海默病模型的方法之一.
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诱导大鼠骨髓间充质干细胞表达神经胆碱乙酰化转移酶
目的:胆碱乙酰化转移酶是胆碱能神经系统功能变化的重要标记.观察大鼠骨髓间充质干细胞表达神经胆碱乙酰化转移酶的情况,探讨其定向诱导分化为特异胆碱能神经元的有效条件.方法:实验于2006-09/2007-05在暨南大学医学院血液病研究完成.①实验方法:SD大鼠颈椎脱臼处死,无菌条件下取股骨,从骨髓中分离间充质干细胞,待80%～90%融合后胰酶消化传代.体外培养传3代后,向胆碱乙酰化转移酶阳性神经细胞进行诱导分化.实验Ⅰ组:DMEM/F12+0.1 mmol/L 2-巯基乙醇+1 mmol/L维甲酸诱导2 d.实验Ⅱ组:体积分数为0.1的胎牛血清+10 μg/L碱性成纤维细胞生长因子+0.1 mmol/L 2-巯基乙醇预诱导2 d,换液后再加入1 mmol/L 维甲酸、10 μg/L表皮生长因子、10 μg/L 神经生长因子继续诱导7 d.实验Ⅲ组:在Ⅱ组方案的基础上加入1 250 u/mL Heparin.空白对照组不作任何处理.②实验评估:观察间充质干细胞诱导后的形态变化;诱导9 d,采用RT-PCR检测及凝胶电泳分析实验Ⅱ组胆碱乙酰化转移酶mRNA的表达;诱导2,9 d,以CY3间接免疫荧光法检测各组胆碱乙酰化转移酶阳性细胞分化情况.结果:①骨髓间充质干细胞诱导后形态学变化:诱导1 d细胞形态逐渐由长梭形变为圆形或椭圆形,折光性及立体感增强,部分细胞可见突起开始形成;诱导2 d细胞突起伸长,胞间或细胞与间质可形成连接;诱导9 d细胞突起变粗,胞浆内分泌颗粒增加并见胞核.②胆碱乙酰化转移酶mRNA的表达:诱导后的细胞高表达胆碱乙酰化转移酶mRNA.③胆碱乙酰化转移酶阳性分化细胞检测:实验Ⅱ组胆碱乙酰化转移酶阳性分化细胞表达率为80%～90%,明显高于实验Ⅰ组的50%～70%,且细胞生长状态较好;实验Ⅲ组细胞脱壁死亡率高,亦有较高的胆碱乙酰化转移酶阳性分化细胞表达率.结论:①鼠骨髓间充质干细胞能被转化为表达神经胆碱乙酰化转移酶的细胞.②胎牛血清、碱性成纤维细胞生长因子、2-巯基乙醇预诱导后,再加入维甲酸、表皮生长因子、神经生长因子继续诱导是分化为特异胆碱能神经元的有效条件.
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雌激素对去卵巢大鼠不同脑区胆碱乙酰化转移酶表达的影响
目的观察内外源性雌激素对大鼠脑内不同部位胆碱乙酰化转移酶(ChAT)表达的影响,探讨雌激素与ChAT的关系.方法 21只雌性Wister大鼠随机分为双侧卵巢切除组(OVX组)、雌激素治疗组(E2组)和对照组.免疫细胞化学染色法观察海马CA1区、皮层区、杏仁复合体区、基底前脑Meynert核区等部位ChAT蛋白表达阳性细胞,放免法测量血中雌激素含量.结果与对照组和E2组比较,OVX组大鼠海马CA1区、大脑皮层区、杏仁复合体区、基底前脑Meynert核区ChAT阳性细胞数显著减少(t=2.68～5.68,P＜0.01),血中雌激素含量明显降低(t=4.90,P＜0.01);E2组和对照组比较无显著差异.结论体内外雌激素含量的变化可影响大鼠脑内多部位ChAT的表达.
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七氟醚预处理对局灶性脑缺血再灌注后大鼠空间学习与记忆能力的影响
目的:目前,对七氟醚的脑保护功能研究较多,其对认知功能方面的研究相对较少,文中观察七氟醚预处理对局灶性脑缺血再灌注后大鼠空间学习与记忆的影响. 方法:雄性SD大鼠24只,随机分成假手术(C)组,缺血再灌注组(I/R)和七氟醚预处理组(S),每组8只.采用线栓法大脑中动脉阻断前脑血供1h,拔出栓线给予再灌注,七氟醚预处理组术前吸入七氟醚1h,呼气末七氟醚浓度维持在1.0(2.4%)肺泡低有效浓度(MAC).再灌注72h后利用Morris水迷宫测量术后大鼠空间学习与记忆的能力,用免疫组织化学法测定大鼠海马CA1区胆碱乙酰转移酶(ChAT)的变化. 结果:七氟醚预处理组大鼠逃避潜伏期明显短于缺血再灌注组(P<0.05),在记忆保留实验中七氟醚预处理组大鼠穿越平台次数和平台所在象限探索时间明显多于缺血再灌注组(P<0.05),海马CA1区ChAT阳性细胞的数目七氟醚预处理组也明显多于缺血再灌注组(P<0.05). 结论:1.0 MAC七氟醚预处理1h可能通过保护CA1区胆碱能神经元,对局灶性缺血再灌注大鼠的空间学习与记忆有明显的改善作用.
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穹隆-海马伞切断对大鼠脑内不同部位胆碱乙酰化转移酶表达的影响
①目的观察穹隆-海马伞切断对大鼠脑内不同部位胆碱乙酰化转移酶(ChAT)表达的影响,探讨与学习、记忆相关的机制.②方法成年健康雌性Wistar大鼠,随机分为穹隆-海马伞切断模型组和假手术组,各5只.在脑立体定位仪上切断双侧穹窿-海马伞,建立动物模型.假手术组除不切断海马伞外,其余步骤同模型组.ChAT免疫细胞化学染色.观察海马CA1区、皮质区、杏仁复合体区、基底前脑Meynert核等部位ChAT阳性细胞表达变化.③结果假手术组大脑各观察区有基础水平的ChAT表达.模型组大脑海马CA1区皮质、大脑皮质区、杏仁复合体区以及Meynert核区ChAT阳性细胞数明显减少,与假手术组比较差异有显著性(t=7.713～17.166,P<0.01).④结论穹隆-海马伞切断大鼠脑内多部位ChAT表达减少可能是学习、记忆障碍原因之一.
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瑞芬太尼对脑缺血再灌注大鼠学习和记忆功能的影响
目的 探讨瑞芬太尼对脑缺血再灌注大鼠学习和记忆功能的影响.方法 选取成年雄性SD大鼠55只随机分为假手术组,模型组(脑缺血再灌注组),瑞芬太尼低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组11只,制作大鼠全脑缺血再灌注模型,在大鼠全脑缺血再灌注后,低、中、高剂量组大鼠分别经尾静脉泵注瑞芬太尼5 min(速率分别为0.2,0.8,1.8μg· kg-1·min-1).Morris水迷宫实验测试大鼠空间学习及记忆能力.HE染色观察大鼠海马CA1区神经元形态变化及存活的椎体细胞密度;免疫组化法测定海马CA1区的胆碱乙酰化转移酶(ChAT)的含量.结果 与假手术组比较,模型组、瑞芬太尼低剂量组逃避潜伏期明显延长,穿台次数、在平台象限内游泳的路径占总游泳路径的比例均明显减少(P＜0.05);与模型组比较,瑞芬太尼中、高剂量组逃避潜伏期明显缩短,穿台次数、在平台象限内游泳的路径占总游泳路径的比例均明显增多(P＜0.05);与假手术组比较,模型组、瑞芬太尼低剂量组椎体细胞及ChAT阳性细胞数目明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05),瑞芬太尼中、高剂量组椎体细胞及ChAT阳性细胞数目差异无统计学意义(P＞0.05);与模型组比较,瑞芬太尼低剂量组椎体细胞及ChAT阳性细胞数目差异均无统计学意义(P＞0.05),瑞芬太尼中、高剂量组椎体细胞及ChAT阳性细胞数目明显增多,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 全脑缺血再灌注后大鼠经合适剂量的瑞芬太尼后处理,能明显提高海马CA1区的椎体细胞及ChAT免疫阳性细胞的数量,提高全脑缺血再灌注模型大鼠的学习和记忆能力.
