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当归多糖诱导K562细胞向红系样细胞分化及其信号转导通路研究
目的 探讨当归多糖(APS)诱导K562细胞向红系样细胞分化相关的信号转导通路. 方法 实验分组:对照组采用常规方法培养;APS组在常规培养基础上加入APS(终浓度100～500mg/L),分别培养12h、1d、2d、3d.联苯胺染色与分光光度法检测经APS诱导后K562细胞向红系样细胞分化的血红蛋白表达;激光扫描共焦显微镜观察JAK_2、信号转导和转录激活因子5(STAT_5)在各组细胞内的分布;Western blotting检测细胞核、质蛋白中JAK_2、STAT_5的表达变化;免疫沉淀法检测质蛋白中JAK_2的磷酸化改变. 结果 经APS诱导后K562细胞的联苯胺染色阳性率增高,随着APS诱导浓度增加K562细胞合成血红蛋白也增加;APS诱导K562细胞12h、24h和48h,核蛋白中STAT_5表达较对照组增加,质蛋白中STAT_5表达减少;APS组与对照组K562细胞的JAK_2表达未见显著差异,但APS组的JAK_2磷酸化强于对照组. 结论 APS可诱导K562细胞向红系样细胞分化,其机制可能与APS启动JAK_2的酪氨酸磷酸化,继而引起STAT_5核转位,通过信号转导通路的调控影响细胞的增殖分化.
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慢病毒介导的 ATF5基因沉默及其对荷人卵巢癌裸鼠移植瘤增殖的影响
目的：观察慢病毒介导的人转录激活因子5（ ATF5）基因沉默效果，及其对荷人卵巢癌裸鼠移植瘤增殖的影响。方法建立荷人卵巢癌裸鼠模型30只，随机分为实验组、阴性对照组、空白对照组各10只，分别瘤内注射ATF5-siRNA慢病毒、空载慢病毒、PBS。观察移植瘤生长情况，绘制移植瘤生长曲线。4周后处死裸鼠，取出移植瘤组织并称重，计算实验组抑瘤率。采用RT-PCR和Western blot 方法检测各组ATF5 mRNA和蛋白相对水平， TUNEL法检测各组移植瘤组织凋亡指数（ AI ）。结果实验组移植瘤生长速度明显小于阴性对照组和空白对照组，其抑瘤率为49．60％。实验组ATF5 mRNA及蛋白相对表达量、AI分别为0．40±0．09、0．46±0．05、34．63％±1．91％，阴性对照组分别为0．67±0．07、0．72±0．03、6．04％±0．19％，空白对照组分别为0．80±0．07、0．82±0．05、5．07％±0．20％；实验组与阴性对照组、空白对照组比较，P均＜0．01；空白对照组与阴性对照组比较，P＞0．05。结论慢病毒介导的ATF5-siRNA能抑制荷人卵巢癌裸鼠移植瘤中ATF5基因的表达，并明显抑制移植瘤的生长、促进其凋亡。
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转录激活因子5在直肠癌中的差异性表达
目的 分析人直肠癌组织中转录激活因子5(ATF5)的表达变化及其与直肠癌临床病理特征的关系.方法 选取四川大学华西医院胃肠外科中心2009年3～10月期间手术切除的直肠癌及距离肿瘤5 cm以远的正常直肠组织标本92对,分别应用实时荧光定量RT-PCR和免疫组织化学染色SP法检测ATF5 mRNA和蛋白的表达情况.结果 直肠癌组织中33例(35.9%)ATF5 mRNA表达上调,但ATF5 mRNA相对表达量与正常直肠组织相比,二者间差异无统计学意义(P=0.363),并且ATF5 mRNA表达与患者年龄、性别、肿瘤类型、分化程度、浸润深度,淋巴结转移、远处转移及TNM分期均无关(P>0.05);但直肠癌组织中ATF5蛋白的表达高于正常直肠组织(p=0.000),并且其表达与肿瘤分化程度有关(P=0.013),而与其他临床病理因素无关(P>0.05).结论 ATF5蛋白的表达与直肠癌的发生和分化相关,但这种相关需要进一步的研究证明.
关键词： 转录激活因子5 直肠癌 实时荧光定量RT-PCR 免疫组织化学染色 -
干扰ATF5功能对卵巢癌细胞紫杉醇敏感性影响
目的 探讨干扰转录激活因子5 (ATF5)功能对卵巢癌细胞SKOV3紫杉醇(PTX)敏感性的影响.方法 应用RT-PCR、Western blot方法检测SKOV3细胞中ATF5的表达；WST-8法检测不同浓度PTX(0、10、20、40、80、100 nmol/L)与SKOV3细胞作用不同时间(24、48、72 h)后细胞增殖情况；将SKOV3细胞分为空质粒组(vector组)、干扰质粒组(dnATF5组)、药物组(PTX组)、联合治疗组(dnATF5+ PTX组),对vector组、dnATF5组、dnATF5+ PTX组进行质粒转染,转染后24 h PTX组和dnATF5+ PTX组给予PTX(70 nmol/L)作用48 h,WST-8法和流式细胞术检测各组细胞的增殖抑制率或细胞凋亡率；Western blot检测干扰质粒转染SKOV3不同时间(0、24、48 h)后Bcl-2蛋白的表达.以急性视网膜色素上皮-19 (ARPE-19)二倍体细胞作为正常对照.结果 卵巢癌SKOV3细胞中高表达ATF5；PTX对SKOV3细胞生长具有明显的抑制作用,呈剂量和时间依赖性(F=497.68～11 286.93,P＜0.05)；干扰ATF5功能后明显促进PTX诱导的SKOV3细胞增殖抑制或细胞凋亡(t=11.40、13.86,P＜0.05)；与ARPE-19细胞相比,干扰ATF5功能联合PTX作用对SKOV3细胞增殖和凋亡的影响更明显(t=11.50、13.86,P＜0.05)；干扰ATF5功能后SKOV3细胞Bcl-2蛋白的表达明显下调(F=158.38,P＜0.05).结论 ATF5在卵巢癌SKOV3细胞中高表达,干扰ATF5能明显增强卵巢癌SKOV3细胞对PTX的敏感性,其机制可能与Bcl-2的下调有关；干扰ATF5功能联合PTX作用对肿瘤细胞的疗效强于二倍体细胞.
