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海马放射状胶质细胞激活后Rest和Runx1t1基因的表达变化
目的 探讨经切割穹隆海马伞侧海马提取液诱导而激活的海马放射状胶质细胞的基因表达变化.方法 将分离、纯化后的海马放射状胶质细胞分别加入正常侧和切割穹隆海马伞侧海马提取液,7d后利用免疫荧光法检测两组细胞的数量和生长情况;利用基因芯片分析细胞内基因表达情况;利用实时定量PCR分析神经干细胞向神经元分化的相关基因Rest和Runx1t1的转录情况.结果 与正常组相比,切割组放射状胶质细胞的数量明显增多,胞体增大,突起增粗变长.基因芯片结果显示,在所检测的709个基因中,切割组中10个基因表达明显上调,10个基因明显下调;实时定量PCR结果表明,切割组Rest和Runx1t1的转录水平均显著高于正常组(P＜0.05).结论 切割穹隆海马伞海马提取液可诱导海马放射状胶质细胞的激活,提高Rest和Runx1t1基因转录水平.
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穹隆海马伞切割后大鼠海马内RUNX1T1 mRNA和蛋白的表达变化
目的 观察穹隆海马伞切割后不同时间点海马内RUNX1T1 mRNA和蛋白的表达变化及定位.方法 行穹隆海马伞切割术,制备模型大鼠.实验分为正常组、切割3d组、切割7d组、切割14d组、切割21d组、切割28d组.1.提取海马组织总mRNA,用Real-time PCR检测大鼠海马组织中RUNX1T1mRNA的表达;2.提取海马组织总蛋白,用Western blotting检测海马内RUNX1 T1蛋白的表达;3.行脑冷冻切片,行RUNX1T1免疫荧光检测和Hoechst标记,观察海马齿状回中RUNX1T1/Hoechst双标阳性细胞.结果 Real-time PCR检测显示,切割3d组海马组织中RUNX1T1 mRNA的表达明显上调,其余各组差异不明显;Western blotting检测结果显示,正常组海马中有微量RUNX1T1蛋白表达,而切割3d组海马组织中RUNX1T1蛋白表达量明显上升,并达到高峰,7d时仍有较多的表达,此后,14d、21d、28d组中RUNX1T1蛋白表达很快又恢复到正常水平;免疫荧光检测结果表明,正常组海马齿状回中有少量的RUNX1T1/Hoechst阳性细胞,切割3d组海马齿状回中RUNX1T1/Hoechst阳性细胞数量多,切割7d组逐渐减少,切割14d组、21d组和28d组与正常组差别不明显.结论 穹隆海马伞切割后海马内RUNX1T1mRNA和蛋白表达在早期呈短暂性上调,并定位于海马齿状回颗粒下层,推测可能与海马神经再生过程中神经干细胞向神经元分化有关.
