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孕期亚硝酸盐暴露对子鼠视皮质突触改变的影响
目的 建立亚硝酸盐暴露模型,探讨孕期亚硝酸盐暴露对子鼠视皮质突触数量的影响及其改变机制.方法 采用免疫荧光染色法观察对照组和模型组(低剂量组与高剂量组)子鼠出生后0d(P0)、P7、P14、P30的的视皮质突触素(SYN)和γ突触核蛋白(γ-synuclein)的改变,利用Western blotting和水迷宫实验对SYN蛋白的表达进行进一步验证.结果 横向比较(剂量)发现,亚硝酸盐暴露组SYN减少(P＜0.05)而γ-synuelein阳性细胞增多(P＜0.05),且与亚硝酸盐存在剂量依赖关系(P＜0.05).纵向比较(年龄)发现,P0、P7、P14、P30 SYN表达随着年龄增长而增多(P＜ 0.05),γ-synuclein表达减少(P＜0.05),剂量(MS =2.00,F=55.22,P＜0.05)与年龄(MS=1.11,F=30.68,P＜0.05)之间存在交互作用且剂量的影响作用更大.Western blotting和水迷宫实验结果与免疫荧光统计结果一致.结论 孕期亚硝酸盐暴露会影响子代视皮质突触的发育,减少突触数量,且对其影响与亚硝酸盐暴露剂量存在依赖关系,而γ突触核蛋白的过度表达可能是突触丢失的主要原因.
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γ突触核蛋白与基质金属蛋白酶9在乳腺癌中表达的相关性
目的 检测γ突触核蛋白(SNCG)与基质金属蛋白酶9(MMP-9)在浸润性乳腺癌组织以及T47D和T47 DSNCG-细胞中的表达,探讨SNCG与MMP-9的相关性.方法 选择2009年6月至2012年6月手术切除的96例浸润性乳腺癌标本[女性,年龄(56±8)岁],采用免疫组化法分别检测组织标本中SNCG和MMP-9的表达情况.建立T47D与SNCG干扰T47DSNCG-细胞株,采用Western blot法检测SNCG与MMP-9蛋白的表达,real-time PCR检测SNCG与MMP-9基因的表达.结果 96例标本中,26例(27.1％) SNCG与MMP-9同时表达,30例(31.12％)同时不表达,二者之间的表达呈明显正相关(r =0.655,P=0.000).T47D细胞株SNCG蛋白表达水平是T47DSNCG-细胞株的2.1倍,SNCG mRNA表达水平约为T47DSNCG-细胞的13.5倍.T47D细胞株MMP-9蛋白表达水平是T47DSNCG-细胞株的1.6倍,MMP-9 mRNA表达水平是T47DSNCG-细胞株的7.3倍.结论 SNCG、MMP-9蛋白在乳腺癌中的表达呈明显正相关.SNCG可能通过调节MMP-9的表达而影响乳腺癌的浸润、转移.
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化疗药物对高表达SNCG的乳腺癌细胞株T47D的抑制作用的实验研究
目的:探讨各种化疗药物对高表达γ突触核蛋白(SNCG)的乳腺癌T47D细胞株的抑制作用.方法:常规培养不表达及高表达SNCG的乳腺癌MCF-7及T47D细胞株.采用MTF法观察顺铂(DDP)、阿霉素(ADM)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、长春新碱(VCR)、紫杉醇(TAX)、依立替康(CPT-11)对细胞的抑制作用,并用流式细胞术分析药物作用后的细胞周期变化及细胞凋亡.结果:作用60 h后,ADM、VCR、TAX及CPT-11对T47D细胞的抑制作用显著低于MCF-7细胞(P＜0.01),而DDP、5-Fu对T47D细胞的抑制作用与MCF-7细胞相比差异无显著性(P＞0.05),且显著高于其他4种抗肿瘤药物(P＜0.01).药物作用T47D细胞60h后,DDP、5-Fu组的细胞增殖指数(PI)及Caspase-3表达均较对照组及其他4组差异有极显著性(P＜0.01).结论:DDP及5-Fu对高表达SNCG的T47D细胞的抑制作用显著高于ADM、VCR、TAX及CPT-11,此可为临床对乳腺癌患者个体化治疗方案的选择提供体外实验依据.
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葛根素联合γ突触核蛋白siRNA对膀胱癌细胞生长的抑制作用
目的:研究葛根素联合γ突触核蛋白(synuclein gamma,SNCG)siRNA对膀胱癌细胞生长的影响.方法:用0,100,200,400,800,1600 μg/mL的葛根素培养液培养膀胱癌细胞,以MTT法检测细胞增殖变化并计算半数抑制浓度.在膀胱癌细胞中转染SNCG siRNA重组慢病毒和阴性对照慢病毒,以实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和Western印迹法检测干扰效果.用半数抑制浓度的葛根素处理稳定转染SNCG siRNA重组慢病毒的膀胱癌细胞,MTT法检测细胞增殖变化,平板克隆试验检测细胞克隆形成能力,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡变化,Western印迹法检测细胞中活化的caspase-3 (C-caspase-3)、活化的caspase-9(C-caspase-9)、Bcl-2相关x蛋白(Bax)蛋白表达水平.结果:100,200,400,800,1 600 μg/mL的葛根素处理后的膀胱癌细胞存活率均低于0μg/mL处理组(P＜0.05),其半数抑制浓度为(587.26±61.45)μg/mL.转染SNCG siRNA重组慢病毒的膀胱癌细胞中SNCG表达水平低于转染阴性对照重组慢病毒的膀胱癌细胞(P＜0.05).下调SNCG或葛根素处理后的膀胱癌细胞增殖能力和克隆形成能力均降低,细胞凋亡率升高,细胞中C-caspase-3,C-caspase-9,Bax蛋白水平也升高.与下调SNCG或葛根素处理后的膀胱癌细胞比较,葛根素处理下调SNCG的膀胱癌细胞的增殖和克隆形成能力均降低,细胞凋亡率升高,细胞中C-caspase-3,C-caspase-9,Bax蛋白表达水平也升高.结论:葛根素联合SNCG siRNA能够抑制膀胱癌细胞生长、诱导膀胱癌细胞凋亡.
