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MiR-382促进大鼠正常肝细胞BRL-3A增殖
目的 探讨miR-382对大鼠正常肝细胞BRL-3A增殖和凋亡的影响.方法 BRL-3A细胞瞬时转染miR-382的模拟物和抑制物48 h,MTT法测定细胞活性;流式细胞术检测细胞周期;Real-time PCR检测细胞增殖和凋亡相关基因的表达情况.结果 在大鼠BRL-3A细胞中,转染模拟物可以显著增加miR-382的表达,转染抑制物可以显著降低miR-382的表达(P＜0.01).MTT检测表明,miR-382过表达后,BRL-3A细胞活性明显提高;流式细胞术检测表明,miR-382过表达组S期的细胞数明显增加,而miR-382干涉组S期的细胞数明显减少;用Real-timePCR检测细胞增殖/凋亡相关基因mRNA表达水平表明,miR-382过表达后,BRL-3A细胞增殖相关基因增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2和Ccnd1的mRNA表达水平上调,细胞凋亡相关基因Caspase-3和Bax的mRNA表达水平下调,而miR-382干涉组与上述结果相反.结论 miR-382通过促进细胞增殖相关基因表达,抑制细胞凋亡相关基因表达而促进大鼠正常肝细胞BRL-3A增殖.
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miR-382对胃癌细胞系MGC-803迁移、侵袭和增殖的影响
目的 探讨miR-382对胃癌细胞系MGC-803迁移、侵袭和增殖的影响.方法 实时(Real-time)聚合酶链反应(PCR)分析50例胃癌组织(C)及其癌旁正常组织(N)中miR-382的表达水平;用pcDNA3.1载体构建过表达miR-382的重组质粒(pcDNA-miR-382),实现miR-382在MGC-803细胞中的过表达;分别用划痕实验、Transwell和CCK-8法检测细胞迁移、侵袭和增殖能力.结果 与癌旁对照组相比,41例(82％)胃癌组织中出现miR-382的表达下调;过表达miR-382能显著抑制MGC-803细胞的迁移、侵袭和增殖能力(P＜0.05).结论 miR-382的表达下调可能与胃癌的进展有关,过表达miR-382可以抑制胃癌MGC-803细胞的迁移、侵袭和增殖.
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MiR-382对γδT细胞杀伤肺癌细胞活性的影响及机制研究
目的 探讨γδT细胞对肺癌细胞系A549的杀伤活性,并研究miR-382在其中发挥的作用.方法 采用流式细胞术鉴别γδ T细胞LDH释放实验检测γδ T细胞和miR-382对A549的杀伤活性.荧光定量PCR检测miR-382在肺癌细胞系A549中的表达情况,Western blot法检测miR-382对c-FLIP表达的影响.Western blot试验检测miR-382及γδ T细胞处理后A549细胞Smac/DIABLO和细胞色素C的释放及caspase-8、caspase-9和caspase-3的活化.结果 miR-382处理能显著增强γδ T细胞对A549的杀伤活性,增强γδ T细胞对A549细胞caspase-8、caspase-9和caspase-3的活化及细胞色素C和Smac/DIABLO的释放,下调A549细胞中c-FLIP蛋白的表达.转染c-FLIP质粒能显著抑制miR-382对γδ T细胞的协同效应.结论 MiR-382通过下调肺癌细胞中c-FLIP的表达来增强γδT细胞对其的杀伤活性.
