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凋亡抑制蛋白c-FLIP高表达与白血病细胞耐药的关系
目的:探讨抗凋亡蛋白c-FLIP的表达对于白血病细胞系Kasumi-1细胞耐药的作用及其机制.方法:应用Tet-on系统,通过强力霉素(doxycycline,Dox)调控c-FLIP的条件性表达;将c-FLIP基因与慢病毒目的载体pLVX-Tight-puro连接,感染Kasumi-1细胞并获得稳定表达c-FLIP蛋白的稳定克隆;应用实时荧光定量PCR和Western blot方法证实c-FLIP在mRNA和蛋白水平的过表达情况;通过流式细胞术分析Fas激动剂CH11和HDAC抑制剂苯丁酸钠处理的Kasumi-1细胞的凋亡变化,以及过表达c-FLIP蛋白后对凋亡发生的影响;应用吉姆萨染色观察细胞凋亡形态变化,Westem blot检测caspase-8凋亡信号通路的激活情况.结果:CH11和苯丁酸钠能够诱导Kasumi-1细胞凋亡,在Kasumi-1细胞过表达c-FLIP蛋白后,细胞能够抵抗CH11和苯丁酸钠诱导的凋亡;Westernblot显示c-FLIP过表达阻滞了caspase-8凋亡信号通路的激活.结论:c-FLIP基因高表达使白血病细胞系Kasumi-1细胞对CH11和苯丁酸钠产生耐药作用.
关键词： c-FLIP 白血病 Kasumi-1细胞 白血病细胞耐药 -
脓毒症大鼠肺组织c-FLIP的变化及乌司他丁对c-FLIP的影响
目的 观察脓毒症大鼠的肺组织中c-FLIP的变化情况,并探讨乌司他丁对c-FLIP水平的影响.方法 将30只雄性Sprague-Dawley大鼠随机(随机数字法)分为假手术组(Sham组)、脓毒症模型组(CLP组)及乌司他丁治疗组(UTI组),每组10只.Sham组不结扎穿刺盲肠,余同CLP组;CLP组采用肓肠结扎并穿刺法造模;UTI组造模后立即经阴茎静脉注射乌司他丁注射液(50000 U/kg).12 h后处死大鼠并采取肺组织,光镜下观察形态学变化;Western-Blot法检测c-FLIP蛋白表达,RT-PCR法检测c-FLIP基因表达.应用SPSS 11.5进行统计学分析,多组比较采用方差分析,两两比较采用LSD-t检验.结果 脓毒症组光镜下肺泡腔内中性粒细胞和大量红细胞渗出,c-FLIP蛋白和基因表达较假手术组显著降低(P＜0.05);用乌司他丁治疗后,光镜下病理改变减轻,c-FLIP蛋白和基因表达较脓毒症组显著升高(P＜0.05).结论 脓毒症中c-FLIP在肺组织中的表达下降,提示肺组织的细胞凋亡增加.乌司他丁能上调脓毒症大鼠肺组织中c-FLIP的表达.
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c - FLIP 调节 TRAIL 诱导胃癌细胞凋亡敏感性的研究
目的：探讨凋亡抑制蛋白 c - FLIP 对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）诱导胃癌细胞 SGC7901凋亡的影响。方法采用 RNAi 技术干扰 c - FLIP 的表达，MTT 法测定细胞活力、采用 Hoechst 33258染色及流式细胞仪检测细胞凋亡，定量 PCR 和 Western blot 法检测 c - FLIP，半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-8（caspase -8）的表达。结果特异性的 RNAi 能够显著抑制 c - FLIP mRNA 和蛋白的表达。单独使用不同浓度 TRAIL 处理 SGC7901细胞24 h 后，发现细胞的存活率有所降低，但没有显著差异。在干扰 c - FLIP 表达的同时用 TRAIL 100 ng/ ml 作用胃癌细胞 SGC7901不同时间（6 h，12 h，24 h），发现作用24 h 后，细胞的存活率为对照组的62.8%，显著降低（ P <0.05），而处理后不同时间的对照组细胞存活率无显著差异（ P >0.05）。凋亡实验显示在二者共同作用 SGC7901细胞24 h 后，能够促进细胞的凋亡。Western blot 结果显示二者共同作用24 h 后，c - FLIP 显著降低、caspase -8及激活型 caspase -8（p -18）的表达均显著升高。结论抑制 c - FLIP 的表达增强了 TRAIL 诱导胃癌细胞 SGC7901的凋亡。
关键词： 胃癌细胞 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 c-FLIP 细胞凋亡 敏感性 -
siRNA干扰c-FLIP表达治疗胆囊癌的实验研究
目的 检测c-FLIP在胆囊癌组织中的表达,探讨siRNA(small interfering RNA)干扰胆囊癌细胞c-FLIP表达后对细胞生长的影响.方法 用免疫组化法检测10例正常胆囊组织,10例胆囊腺瘤和35例胆囊癌组织中c-FLIP的表达;siRNA干扰c-FLIP表达后,通过生长曲线测定、倒置相差显微镜检查和流式细胞仪检测细胞生长状况.结果 在胆囊癌组织中,c-FLIP的表达明显高于在胆囊腺瘤(P<0.05)和正常胆囊组织中的表达(P<0.05);siRNA干扰c-FLIP表达后,胆囊癌细胞株SGC-996的生长明显受到抑制,倒置相差显微镜检查发现,干扰后细胞凋亡细胞比例明显增加,流式细胞仪的检查发现干扰后细胞凋亡比例与对照组相比明显上升(P<0.05).结论 siRNA干扰c-FLIP表达的靶向治疗有可能成为治疗胆囊癌的新的方法.
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膀胱癌组织中c-FLIPmRNA表达与膀胱癌生物学行为的相关性分析
细胞型Fas相关死亡区域蛋白样白细胞介素-β1转换酶抑制蛋白(c-FLIP)是一类含有死亡效应结构域的凋亡抑制蛋白.体外研究表明在Fas/FasL凋亡途径中,c-FLIP可竞争性抑制caspase-8与死亡诱导信号复合体结合,从而阻断Fas介导的凋亡信号传导,使肿瘤细胞过度生长.
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c-FLIP在乳腺癌中的表达及其与患者预后的相关性研究
目的 探讨c-FLIP在乳腺癌中的表达及其与临床病理特征和患者预后的关系,初步探讨其在乳腺癌发生、发展中的意义.方法 应用免疫组化SP法对101例术前没有接受过放射治疗和化学治疗的乳腺癌手术标本及相应的16例癌旁组织进行c-FLIP检测,并结合随访资料对c-FLIP和临床病理学指标、患者预后的关系进行综合分析.结果 c-FLIP在乳腺癌组织中表达的阳性率为97%,而在癌旁组织中表达的阳性率为50%,癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织(P＜0.01).c-FLIP在乳腺癌中的表达与患者年龄、肿瘤大小、肿瘤分期、组织细胞学类型、分化程度、淋巴结转移等无关(P＞0.05).不同表达水平的c-FLIP组之间在患者术后远处转移方面无明显差异(P＞0.05),在患者预后方面差异则有统计学意义(P＜0.05).结论 c-FLIP在乳腺癌组织中有高水平的表达,有可能成为判断乳腺癌患者预后的独立指标.
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c-FLIP与肿瘤关系的研究进展
随着分子生物学的发展,人们认识到肿瘤的发生发展是多因素、多事件共同作用的结果.不仅与原癌基因和抑癌基因活性的改变有关,也与细胞凋亡的调节失控密切相关.凋亡是指细胞在基因调控下程序化的细胞死亡.
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TRAIL、c-FLIP在大肠癌与转移淋巴结中的表达及意义
目的检测TRAIL、c-FLIP在结直肠癌中的表达情况，探讨二者在大肠肿瘤的浸润转移及凋亡调控机制的可能相互关系和作用。方法选取新鲜结直肠癌、配对的癌旁正常组织各85例及转移淋巴结51例，运用MaxVision免疫组化和Western blot蛋白定量检测TRAIL、c-FLIP在各组间的表达，所得结果进行统计学分析。结果（1）TRAIL在结直肠癌组织中的定位及表达位于细胞膜及细胞浆，而c-FLIP主要位于细胞浆。（2）TRAIL在癌组、转移淋巴结（LNM）组与癌旁正常组的均广泛表达，三者比较差异无统计学意义（P＞0.05）；癌组中，未/低分化阳性表达与中高分化比较、无LNM组与LNM组比较差异无统计学意义（P＞0.05）；（3）c-FLIP在癌组阳性表达明显高于正常组（且无一例强染色）；转移淋巴结组阳性表达亦明显高于正常组，其强阳性表达88.2%（45/51），与癌组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。其癌组中未发生淋巴转移阳性表达88.2%（30/34）、淋巴转移100%（51/51）、未/低分化和中高分化分别为96.8%（30/31）、94.4%（51/54），81例阳性表达中强阳性74%（60/81）；未/低分化腺癌与中高分化组表达比较差异无统计学意义（P＞0.05）。（4）Western blot蛋白定量检测发现，对于TRAIL，呈现出c-FLIP蛋白表达越高，其表达也反应性增高的趋势，TRAIL蛋白的表达与c-FLIP的表达呈相互拮抗性正相关。结论（1）c-FLIP在结直肠癌组织和转移淋巴结中存在过高表达，在正常组织低表达或不表达，而TRAIL在癌组织和转移淋巴结组织也存在相互拮抗性增高趋势。（2）高表达的c-FLIP可能与TRAIL死亡受体凋亡途径相互作用，对大肠癌的发生进展起到一定的作用。
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脂质体介导反义C-FLIP对BGC823细胞凋亡的影响
目的:探讨脂质体介导下c-FLIP(Cellular-FLICE Inhibitory Protein)反义寡核苷酸对胃癌细胞系BGC823的作用.方法:RT-PCR和Western Blot方法检测c-FLIPL、c-FLIPS的mRNA和蛋白的表达;MTT法检测细胞抑制率;原位末端标记法、流式细胞术检测细胞凋亡;Western Blot检测蛋白表达变化.结果:c-FLIP基因编码的2种mRNA和蛋白在Hela、BGC823细胞中呈阳性表达.MTT显示脂质体介导反义寡核苷酸可显著抑制BGC823细胞增殖;反义寡核苷酸作用细胞36h后,TUNEL检测可见明显阳性染色,流式细胞分析发现在G1峰前出现凋亡峰;Westem Blot可见c-FLIPL和c-FLIPS蛋白表达显著下降.结论:c-FLIPL、c-FLIPS mRNA和蛋白在Hela、BGC823细胞中表达.脂质体介导c-FLIP反义寡核苷酸转染BGC823细胞后抑制目的蛋白表达,抑制细胞生长、促进凋亡,其作用呈剂量依赖性.研究靶向c-FLIP的反义基因治疗药物可能为胃癌的临床治疗提供新的方法和思路.
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c-FLIP在凋亡增殖中的双向调节作用及与肿瘤预后和治疗关系的研究
细胞型Fas相关死亡域样白介素-1β转换酶抑制蛋白（c-FLIP）在细胞凋亡和增殖信号通路中具有重要的调节作用。一方面通过与Caspase-8竞争性结合上游信号阻断凋亡通路，另一方面经酶切释放出p43-FLIP和p22-FLIP片段促进NF-κΒ、Erk等增殖信号通路，终引发肿瘤发生发展、浸润转移。c-FLIP的双向调节作用与蛋白表达量、底物的亲和力和亚细胞定位密切相关。恶性肿瘤中c-FLIP高表达使细胞逃逸机体免疫监视、耐受化疗药物杀伤以及抵抗TRAIL、FasL诱导的凋亡。本文初步阐释c-FLIP在不同的细胞微环境中对凋亡-增殖通路的双向调节作用及其分子机制，并对c-FLIP与恶性肿瘤预后、化疗和TRAIL生物治疗相关性进行综述，为肿瘤化疗耐药和TRAIL抵抗提供理论基础。
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miR-512-3p在乳腺癌中的表达及其功能研究*
目的：观察miR-512-3p在浸润性乳腺癌和癌旁组织中的表达，以及对乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖、凋亡、周期和克隆形成能力的影响，并分析其可能机制。方法：运用荧光定量PCR检测浸润性乳腺癌和癌旁组织中的miR-512-3p的表达量。运用MTT法、流式细胞仪和平板克隆形成实验分析miR-512-3p对细胞增殖、凋亡、周期和克隆形成能力的影响。通过Tar-getScan、PicTar和miRanda软件寻找miR-512-3p可能靶基因，应用RT-PCR和Western blot技术进行验证。结果：乳腺癌组织中miR-512-3p表达明显低于正常组织（P<0.05）。MTT试验中，72 h浓度为100 nmol/L时，miR-512-3p对乳腺癌细胞增殖的抑制作用明显，抑制率为45.38%。miR-512-3能明显诱导细胞发生早期凋亡（9.32±0.41）%，与空白对照组（3.1±0.54）%，负对照组（2.9±0.39）%比较，差异有统计学意义（P<0.05）。与空白对照组比较，G0/G1期细胞明显增多，G2/M期细胞明显减少（P<0.05）。平板克隆试验显示过表达miR-512-3p可显著抑制细胞的克隆形成能力，并与对照组差异性显著。荧光定量PCR和Western bolt实验结果显示100 nmol/L miR-512-3p显著抑制c-FLIP mRNA和蛋白表达水平。结论：miR-512-3p在乳腺癌组织中表达明显低于正常组织，其可能通过作用于下游基因c-FLIP抑制乳腺癌细胞株MDA-MB-231的增殖和克隆形成能力，诱导凋亡，其在肿瘤发生发展中可能担任着抑癌基因的角色，可能成为未来乳腺癌诊断和治疗的一个新的靶点。
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类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中钙网织蛋白经NF-κB通路上调c-FLIP的表达
目的 探究类风湿关节炎(RA)患者成纤维样滑膜细胞(FLS)中钙网织蛋白(CRT)上调细胞型Fas相关死亡域样白细胞介素1β转换酶抑制蛋白(c-FLIP)表达的分子机制.方法 免疫组织化学染色分析c-FLIP在RA和骨关节炎(OA)患者膝关节滑膜中的表达与定位.酶解法分离RA/OA FLS,作为体外细胞培养模型.细胞免疫荧光和Western blot检测c-FLIP在RA/OA FLS中的表达.Western blot探究CRT对RA FLS中c-FLIP表达的影响及其分子机制.结果 c-FLIP在RA滑膜中呈高表达,主要集中在衬里层和衬里下层的FLS和血管内皮细胞等,而在OA滑膜罕见阳性;RA滑膜中c-FLIP表达显著高于OA(t=11.717,P<0.001).细胞免疫荧光和Western blot结果显示,c-FLIP主要定位于胞质,且RA FLS中c-FLIP表达高于OA FLS.FLS与CRT(0、10、50、100 μg/L)共培养,RA FLS中c-FLIP表达上调且核因子(NF)-κB磷酸化增加,具有浓度依赖性.NF-κB抑制剂BAY 11-7082预干预后, CRT上调RA FLS中c-FLIP表达的作用受到明显抑制.结论 RA FLS中的CRT可能部分经NF-κB通路上调抗凋亡蛋白c-FLIP的表达,为今后RA的临床治疗提供新的思路.
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类风湿关节炎患者PBMC中凋亡相关蛋白Bcl-2与c-FLIP的表达及其意义
目的 探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMC)中凋亡相关蛋白Bcl-2与c-FLIP的表达水平及其临床意义.方法 60例类风湿关节炎患者外周血标本按RA疾病活动指数(DAS28)分为低度活动期(DAS28<3.2)、中度活动期(DAS283.2～5.1)与高度活动期(DAS28>5.1),以同期25例健康体检者外周血作为健康对照组(N组).实时荧光定量PCR法检测RA患者PBMC中Bcl-2、c-FLIP、caspase-8凋亡相关蛋白的mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法检测PBMC中c-FLIP、caspase-8蛋白表达水平.结果 Bcl-2的低活动组mRNA相对表达量为1.02±0.35,高于健康对照组(0.32±0.18,P<0.05),而中、高活动组分别为0.08±0.01,0.05±0.02,低于健康对照组(均P<0.05).c-FLIP的低、中、高三个活动组mR-NA相对表达量分别为1.27±0.28,1.32±0.34,1.93±0.40,均高于健康对照组(1.08±0.12,均P<0.05);caspase-8的低、中、高组mRNA相对表达量分别为2.77±0.97,4.52±0.85,2.13±0.44,也均高于健康对照组(均P<0.05).中活动组c-FLIP蛋白表达明显高于健康对照组(P<0.05),而低、高活动组与对照组差异无统计学意义(P>0.05);中、高活动组caspase-8蛋白表达明显高于健康对照组(P<0.05),而低活动组表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 PBMC中凋亡相关蛋白c-FLIP mRNA表达水平随着RA疾病的进程增高,而Bcl-2只有低活动组有明显增高,此可为类风湿关节炎发病机制的后续研究提供参考.
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c-FLIP和TGF-β1在喉鳞癌组织中的表达及其临床相关性研究
目的 探讨c-FLIP和TGF-β1在喉鳞癌组织中的表达与肿瘤的病理学分级和患者临床分期及颈淋巴结转移之间的相关性.方法 应用RT-PCR法检测30例喉鳞癌患者肿瘤组织及喉部正常组织中c-FLIP mRNA的表达情况,同时应用免疫组化法对实验组及对照组中c-FLIP和TGF-β1蛋白的表达情况进行了检测.结果 ①实验组中,c-FLIP mRNA表达阳性者有18例,而对照组中仅3例表达阳性.②c-FLIP、TGF-β1在实验组中的平均阳性细胞表达率分别为44.87%和48.56%,而在对照组中此相应值分别为8.63%和8.25%.③两因子在喉鳞癌组织中的表达水平均与患者临床分期和肿瘤病理学分级成正相关,且它们在伴颈淋巴结转移组中的表达水平均明显高于非转移组.结论 ①c-FLIP、TGF-β1在喉鳞癌组织中高表达而在喉部正常组织中低表达.②c-FLIP和TGF-β1两因子在喉鳞癌组织中的表达水平与喉鳞癌患者的临床病理参数密切相关.③c-FLIP和TGF-β1可能共同参与了喉鳞癌的发生、发展.
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c-FLIP反义寡核苷酸对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤抑制作用
目的 研究细胞型Fas相关死亡域样白介素-1β转换酶抑制蛋白反义寡核苷酸(c-FLIP-ASODN)对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤的抑制作用.方法 采用肺癌A549细胞株建立裸鼠移植瘤模型,将其分为ASODN组及空白对照组、脂质体转染组、无义寡核苷酸(SODN)组,通过移植瘤生长曲线、终末瘤重免疫组化法检测c-FLIP蛋白表达、增殖指数,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测移植瘤c-FLIP mRNA变化,TUNEL检测凋亡指数.结果 ASODN干预后移植瘤生长缓慢,22 d时瘤体积达到大,此后呈缩小趋势,终末瘤体积及瘤重分别为(376.9±45.8)mm3、(512.4±33.6)mg,明显低于其他各组(P＜0.01),抑瘤率为64.31%;ASODN组移植瘤组织增殖指数为(25.71±5.42),c-FLIP mRNA表达量为(0.30±O.05),c-FL.IP蛋白表达阳性率为(19.54±6.36),均明显低于各对照组;凋亡指数为(39.68±6.28),明显高于其他各组(P＜0.01).结论 c-FLIP-ASODN对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长有抑制作用,其机制与降低c-FLIP mRNA和蛋白表达、抑制移植瘤细胞的增殖活性和促进肿瘤细胞凋亡有关.
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C-FLIP在喉癌中的表达及临床意义
目的 探讨c-FLIP(细胞型Fas相关死亡域样白介素-1β转换酶抑制蛋白)在喉癌组织中的表达及临床意义.方法 应用免疫组织化学方法和流式细胞检测方法观察喉癌组织和声带息肉组织中c-FLIP表达情况.结果 喉癌组c-FLIP阳性表达率为81%(35/43),声带息肉组c-FLIP阳性表达率为0%(0/10),两者比较具有非常显著差异(P＜0.01).c-FLIP表达与喉癌分期(早期与进展期)及淋巴结转移相关,染色度随喉鳞状细胞癌分期增高而增高并且有淋巴结转移的癌组织c-FLIP染色度,明显高于无淋巴结转移的喉癌组织.但与性别、年龄、肿瘤组织分级无明显关系.喉癌组与声带息肉组c-FLIP的平均荧光指数分别为4.73±0.74和1.06±0.18两者比较具有统计学意义(P＜0.01).结论 c-FLIP在喉癌组织中表达增高,表明c-FLIP可能在喉癌的发生发展中起重要作用.
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CD40L在CD4+CIK诱导Fas抵抗乳腺癌细胞凋亡中的机制研究
目的:探讨CD40/CD40L交联在诱导Fas抵抗乳腺癌细胞凋亡中的免疫学机制.方法:体外大规模扩增自体CIKs细胞,利用磁珠分选系统纯化其中CD4+T细胞亚群(CD4+OK).用抗Fas激活性抗体CHll诱导乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞凋亡,比较有无CD4+CIK培养上清预处理对MDA-MB-231细胞凋亡率的影响.MDA-MB-231细胞与CD4+CIK在不同效靶比下共孵育6小时和24小时,分别用流式细胞仪检测凋亡率和膜Fas表达,定量RT-PCR法检测胞浆内Bax、Bcl-2、FADD 和c-FLIP)的mRNA含量.在共培养系统中加入抗FasL、抗CD40L和抗IFN-γ中和抗体,分别比较MDA-MB-231细胞凋亡率、膜Fas表达和四种凋亡相关基因的mRNA含量.结果:MDA.MB-231细胞对CHIl诱导的凋亡有抵抗,但经过CD4+CIK培养上清预处理后,敏感性显著提高.MDA-MB-231细胞与CD4+CIK共孵育24小时后,细胞凋亡率明显升高,并与膜Fas表达量呈正相关(r=0.618,P<0.01).在共培养体系中添加抗FasL和抗CD40L中和抗体可完全清除增加的细胞凋亡,而抗IFN-γ中和抗体只能部分清除,凋亡率分别从(33.70±2.77)%降至(7.57±1.15)%、(7.80±0.26)%和(14.21±1.70)%.但MDA-MB-231细胞膜Fas表达可以等效地被抗CD40L和抗IFN-γ中和抗体封闭,分别从(25.90±2.45)%降至(6.93±1.56)%和(8.73±4.70)%.定量RT-PCR结果显示MDA.MB-231细胞与CD4+CIK共孵育6小时时胞浆中c-FLIP表达下降与凋亡率显著相关(r=0.898,P<0.05),而抗CD40L中和抗体可诱导c-FLIP表达升高.结论:CD40/CD40L交联和IFN-γ刺激均参与了CIM+CIK诱导的MDA-MB-231细胞凋亡,但其Fas抵抗性的逆转主要是通过CD40/CIMOL交联抑制c-FLIP的mRNA合成而实现的.
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凋亡相关蛋白死亡受体5、细胞内Fas相关死亡域样白介素1-β转换酶抑制蛋白在胃组织中的表达及临床意义
目的 探讨不同胃组织中凋亡相关蛋白死亡受体(DR5)、Fas相关死亡域样白介素1-β转换酶抑制蛋白(c-FLIP)表达的临床意义.方法 检测胃癌、正常胃黏膜及胃炎组织中DR5和c-FHP蛋白的表达,以及不同分化程度的胃癌组织中的表达差异,对两者进行相关性分析.结果 DR5在胃癌、慢性胃炎、正常胃黏膜中阳性表达率分别为76.67％、53.85％和28.13％;c-FLIP蛋白阳性率分别为85％、30.77％和18.75％,各组比较差异有显著性意义(P＜0.05).DR5蛋白在高、中、低分化腺癌中的表达率分别为38.1％、55％、78.95％,c-FLIP分别为47.62％、70％、94.74％,各组比较差异有显著性意义(P＜0.05).结论 DR5与c-FLIP蛋白在胃癌中均高表达,两者均参与了胃癌的发生.
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抑制c-FLIP基因促进TRAIL诱导的乳腺癌细胞凋亡
目的:探讨抑制c-FLIP的表达对TRAIL诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响.方法:重组腺病毒Ad-c-FLIP-siRNA和Ad-sTRAIL单独及联合感染对TRAIL耐药的乳腺癌细胞MCF-7,应用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测病毒感染后各组细胞内c-FLIP和TRAIL的mRNA表达变化;MTT法和结晶紫染色法检测MCF-7细胞活性,Hoechst33258荧光染色检测各组细胞的凋亡情况.结果:与阴性对照组比较,c-FLIP-siRNA组和c-FLIP-siRNA+TRAIL组c-FLIP的mRNA相对表达量分别是(0.32±0.16)和(0.39±0.48)倍;TRAIL组和c-FLIP-siRNA+TRAIL组TRAIL的mRNA相对表达量分别是(96.21±1.54)和(87.33±1.66)倍;TRAIL组、c-FLIP-siRNA组及c-FLIP-siRNA+TRAIL组的抑制率(％)分别为(60.27± 1.25)、(11.34±1.74)及(74.91± 2.12).对比阴性对照组的凋亡率(3.12± 1.54),TRAIL组(12.79±2.46)和c-FLIP-siRNA+TRAIL组(25.50±3.17)组的凋亡率明显增高(P＜0.05),c-FLIP-siRNA组(6.85± 2.82)的凋亡率变化不明显,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:siRNA抑制c-FLIP基因的表达能显著促进TRAIL对乳腺癌细胞MCF-7凋亡的诱导作用.
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MTT法检测C-FLIP反义寡核苷酸对BGC823细胞的抑制效果
目的探讨脂质体Lipofectamine2000介导下c-FLIP反义寡核苷酸对胃癌细胞系BGC823生长的抑制作用.方法 RT-PCR和Western Blot方法检测c-FLIPL/S的mRNA和蛋白的表达变化;原位末端标记法、流式细胞术检测细胞凋亡;MTT法检测细胞抑制率.结果 Western Blot可见c-FLIPL和c-FLIPS蛋白表达显著下降;反义寡核苷酸作用细胞36 h后,TUNEL检测可见明显阳性染色,流式细胞分析发现在G1峰前出现凋亡峰;MTT显示脂质体介导反义寡核苷酸可显著抑制BGC823细胞增殖.结论 c-FLIPL、c-FLIPS mRNA和蛋白在Hela、BGC823细胞中表达.脂质体介导c-FLIP反义寡核苷酸转染BGC823细胞后抑制目的蛋白表达,抑制细胞生长、促进凋亡,其作用呈剂量依赖性.研究靶向c-FLIP的反义基因治疗药物可能为胃癌的临床治疗提供新的方法和思路.
