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小鼠神经母细胞瘤细胞中神经型钙黏蛋白超表达对突起形成及连环蛋白表达的影响
目的 探讨神经型钙黏蛋白(N-cadherin)调控连环蛋白(catenin)对小鼠神经母细胞瘤细胞(N2a)形态的影响.方法 构建鼠源的N-cadherin融合蛋白超表达载体,利用脂质体转染的方法将空载体pCAG-MCS-EGFP和超表达载体pCAG-N-Cad-EGFP分别转染至N2a细胞,作为对照组和实验组;细胞划痕和黏附实验检测N-cadherin超表达对N2a细胞迁移和黏附的影响,免疫荧光检测N-cadherin超表达对N2a细胞形态的影响,并结合Western blotting检测连环蛋白家族的表达情况.结果 与对照组相比,N-cadherin超表达促进细胞突起的形成,使得N2a细胞突起增多和伸长;N-cadherin超表达增强了黏附性而抑制了细胞的迁移能力;N-cadherin超表达使得细胞内连环蛋白家族中α-catenin、β-catenin和p120蛋白表达均显著上升(P＜0.05),而γ-catenin表达下降但差异不显著(P＞0.05);另外,N-cadherin超表达的细胞有明显的聚集现象.结论 N-cadherin超表达促进N2a细胞突起形成,增强细胞的黏附性从而抑制细胞的迁移能力,调控连环蛋白家族成员的表达并促使细胞聚集.
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CREST对N2a细胞突起生长的影响
目的：观察钙反应性反式激活因子（ CREST ）过表达对小鼠神经母细胞瘤（ N2 a ）细胞突起生长的影响。方法实验分为3组，实验组用pCMV-HA-CREST转染的N2 a细胞，空载体对照组用pCMV-HA转染的N2a细胞，空白对照组用未转染任何试剂的N2a细胞，分别加入70mmol/L KCl 孵育过夜。在转染后24h，48h采用考马斯亮蓝染色法检测N2a细胞突起生长状态。结果在转染后24h，CREST基因过表达的细胞与两对照组细胞相比较，细胞突起生长差异无显著性。在转染后48h，CREST基因过表达的细胞与两对照组细胞相比较，突起生长明显，部分突起交织成网络。两对照组间在细胞转染后各时间点突起生长状态差异无显著性（ P＜0．05）。结论过表达CREST可促进N2 a细胞突起的生长。
关键词： 钙反应性反式激活因子 小鼠神经母细胞瘤细胞 突起生长 -
小鼠神经母细胞瘤N2a细胞脑啡肽酶基因的表达与启动子区甲基化和组蛋白修饰相关
目的 研究小鼠神经母细胞瘤Neuro-2a(N2a)细胞中脑啡肽酶(NEP)基因表达的表观调控机制,探讨DNA甲基化与组蛋白乙酰化之间的相互作用.方法 体外培养N2a细胞,以3μmol/umol/L、5μmol/L DNA甲基化酶抑制5-氮杂脱氧胞苷(5-Aza-dc)及(300、500、700) nmol/L组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)分别处理N2a细胞48 h和24 h.采用逆转录PCR(RT-PCR)、Western blot法分别检测NEP的mRNA、蛋白表达;亚硫酸氢盐测序聚合酶链反应(BSP)法检测NEP基因启动子区DNA的甲基化水平;染色质免疫共沉淀(ChIP)法检测NEP基因启动子区组蛋白H3的乙酰化水平.结果 5-Aza-dc和TSA均能剂量依赖地提高NEP基因的表达(P＜0.01);5-Aza-dc可诱导NEP基因去甲基化(P＜0.01);TSA可增高NEP组蛋白H3乙酰化水平(P＜0.05),但不能明显改变NEP基因DNA的甲基化水平(P＞0.05).结论 在小鼠神经母细胞瘤N2a细胞中NEP基因的表达受DNA甲基化及组蛋白乙酰化的调控,组蛋白乙酰化水平并不影响DNA甲基化状态.
关键词： 小鼠神经母细胞瘤细胞 脑啡肽酶 DNA甲基化 组蛋白乙酰化
