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蛋白激酶A与脂类代谢
蛋白激酶 A（protein kinase A，PKA）为重要细胞信号传导因子，在机体脂类代谢调控中发挥关键作用。PKA 激活关键性脂肪水解酶，如激素敏感脂肪酶（hormone sensitive lipase，HSL）与脂肪甘油三酯脂肪酶（adipose triglyceride lipase，ATGL），以促进脂肪动员。PKA 上调解偶联蛋白-1（un-coupling protein 1，UCP-1）表达，促进棕色脂肪细胞线粒体热量生成，上调机体产热量。PKA 密切参与肝脏细胞脂类合成代谢调控过程。值得关注的是，PKA 信号传导异常，是脂质代谢异常相关疾病，如肥胖、心脑血管疾病、2型糖尿病等疾病的重要发病机制之一。药理学研究亦显示，PKA 与主要调血脂药的药理作用密切相关。本文综述五年来有关 PKA 参与脂类代谢调控的研究进展，以期深入了解 PKA 在脂类代谢中发挥的作用，并为相关疾病的诊疗提供新思路。
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神经介素 B 对大鼠心室肌细胞 L 型钙离子通道调节及机制研究
目的：研究神经介素 B（NeuroB）对成年大鼠心室肌细胞 L 型钙离子通道的调节及信号转导机制。方法应用 RT-PCR 及 Western blot 方法研究 NeuroB 受体 mRNA 及蛋白在成年大鼠心室肌细胞中的表达。应用 ELISA 方法检测 NeuroB 对心室肌细胞中 cAMP 含量的影响。应用全细胞膜片钳技术研究 NeuroB 对成年大鼠心室肌细胞 L 型钙离子通道电流（IL ）的作用，并应用药理学方法阐明其信号转导机制。结果 NeuroB 受体在成年大鼠心室肌细胞中呈高表达。 NeuroB 对大鼠心室肌细胞 IL 具有量效依赖性的增加作用。蛋白激酶 A（PKA）阻断剂 KT-5720能够抑制 NeuroB对该 IL 的增强作用，但蛋白激酶 C（PKC）阻断剂 GF109203X 却无任何效应。 NeuroB 可浓度依赖性增加心室肌细胞中 cAMP 含量水平。结论 NeuroB 对成年大鼠心室肌细胞 L 型钙通道 IL 具有剂量依赖性的增强作用，该作用是通过 NeuroB 受体激活及下游 PKA 激酶途径起效。
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神经肽Urocortin2对吗啡成瘾大鼠VTA神经元放电及DA能神经传递的影响
目的：明确神经肽urocortin2(UCN2)在吗啡成瘾中抑制丘脑腹侧背盖区( ventral tegmental area,VTA)神经活动的机制。方法建立吗啡成瘾大鼠模型,采用七管微电泳方法,电泳UCN2对吗啡成瘾大鼠VTA神经元自发放电的改变,及UCN2对多巴胺( dopamine, DA)能神经元簇发放电模式的影响,明确UCN2在VTA神经元中与DA存在汇聚作用。另外,给予促皮质激素释放因子( coticortropin-releasing factor, CRF)受体阻断剂及蛋白激酶 A ( protein kinase A, PKA)抑制剂,明确UCN抑制吗啡成瘾中发挥关键作用。结果 UCN2使82%(31/38)吗啡成瘾大鼠VTA神经元放电频率减慢,平均放电频率由微电泳前的(20．89±2．86) Hz减少到(13．66±3．93)Hz,给药前后放电频率降低具有显著性( P<0．01), UCN2抑制作用可被PKA抑制剂H89及CRF-2R阻断剂AST-2B取消。另外,微电泳UCN2可抑制吗啡成瘾大鼠VTA中DA神经元的爆发放电,AST-2B可增强 DA的兴奋效应。结论 UCN2与CRF-2R 结合后,通过PKA信号途径,抑制VTA内DA神经元异常放电,在吗啡类药物成瘾中发挥抑制作用,为其用于临床治疗阿片类药物成瘾提供理论依据。
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pEGFP-C3-PENK/NIH3T3表达的脑啡肽对神经细胞PKA表达的影响
目的:观察pEGFP-C3-PENK/NIH3T3表达的脑啡肽对神经细胞疼痛模型兴奋性的抑制作用.方法:取 新生大鼠的皮质神经元细胞培养,以106mL-1的密度种植于培养皿中.细胞分为4组:对照组(神经细胞)、前列腺素刺激组(神经细胞+42 ng/L前列腺素)、脑啡肽组(神经细胞+42 ns/L前列腺素+pEGF-C3-PENK/NIH3T3细胞)和纳洛酮拮抗组(10 mmol/L钠洛酮+神经细胞+42 ng/L前列腺素+pEGF-C3-PENK/NIH3T3细胞).继续培养24 h后收集神经元细胞,提取总蛋白,采用Western blot测定各组神经元细胞中蛋白激酶A(PKA)的量.结果:4组细胞PKA的量比较,差异有统计学意义(F=59.873,P<0.001).与对照组相比,前列腺素刺激组PKA增多(P<0.05);与前列腺素刺激组相比,脑啡肽组PKA减少(P<0.05);与脑啡肽组相比,纳洛酮拮扰组PKA增多(P<0.05).结论:pEGFP-C3-PENK/NIH3T3表达的脑啡肽可以抑制神经细胞PKA系统的活化,其抑制作用可被纳洛酮拮抗.
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嗅三针治疗对阿茨海默病模型大鼠海马蛋白激酶A活性的影响
目的：通过观察嗅三针疗法对阿茨海默病（Alzheimer’s disease ，AD）大鼠的学习记忆能力与海马组织蛋白激酶A （protein kinase A ，PKA ）活性的影响，探讨嗅三针疗法治疗 AD 的作用机制。方法将成年SD雄性大鼠50只随机分为正常对照组、AD模型组、AD＋嗅神经切断模型组、嗅三针组和嗅三针＋嗅神经切断组，每组10只。制作 A D大鼠和 A D嗅神经切断大鼠模型，嗅三针组和嗅三针＋嗅神经切断组均进行嗅三针治疗，通过嗅三针治疗，测试大鼠水迷宫学习记忆能力，并采用 ELISA 法测定海马组织 PKA活性。结果各组大鼠6 d平均逃避潜伏期和平均游泳路程比较，正常对照组、嗅三针组与嗅三针＋嗅神经切断组均显著短于 AD 模型组（P＜0.01，P＜0.05）；嗅三针组短于嗅三针＋嗅神经切断组（P＜0.05）；AD模型组与 AD ＋嗅神经切断组相比较，其差异无统计学意义（P＞0.05）。各组大鼠海马组织 PKA 活性比较，正常对照组、嗅三针组和嗅三针＋嗅神经切断组均明显高于 AD 模型组（P＜0.01），嗅三针组高于嗅三针＋嗅神经切断组（P＜0.05），AD模型组与AD＋嗅神经切断组相比较，其差异无统计学意义（P＞0.05）。结论嗅三针能够显著增强 AD 大鼠学习记忆功能、并且能提高海马组织 PK A 活性，其治疗效应的发挥依赖于嗅觉传导通路的完整性。
