脑啡肽、神经肽Y、神经元特异性烯醇酶与癫痫

脑啡肽(L-ENK)在阿片肽类中含量高,分布亦广.脑啡肽对中枢神经系统具有多种重要的病理生理功能.近年来有人提出,脑啡肽功能亢进是癫痫发病的主要原因之一.神经肽Y(NPY)广泛分布于中枢神经系统,在大脑皮质、海马、丘脑、下丘脑及脑干等处浓度较高,尤以海马内浓度高.大量资料表明,癫痫发作后增加NPY含量具有抗癫痫作用.神经元特异性烯醇酶(NSE)是神经元损伤的敏感性标志物,具有较高的特异性,在神经系统疾病中显著增高;人们逐步把NSE看作是神经损伤的一项指标.弄清ENK、NPY与癫痫的关系以及癫痫后神经细胞的损害情况,有利于揭示癫痫的发作机制,为癫痫的防治提供新思路.

慢性束缚应激模型大鼠海马脑啡肽mRNA和前强啡肽mRNA的表达及中药复方的影响

目的:探讨中药复方逍遥散、四君子汤、金匮肾气丸抗慢性束缚性应激的机理.方法:采用单纯束缚的方法建立慢性束缚性应激的大鼠模型,提取海马总RNA,采用RT-PCR反应扩增脑啡肽和前强啡肽基因,比较二者在海马中的表达情况.结果:显示慢性束缚应激时大鼠海马内脑啡呔mRNA和前强啡肽mRNA的表达明显增强,并且时间越长增强越明显.逍遥散和四君子汤都能降低海马内脑啡肽mRNA的表达,三个复方都能降低前强啡肽mRNA的表达,逍遥散的作用明显优于金匮肾气丸.结论:脑啡肽和前强啡肽都参与了海马对应激的调控,对内源性阿片系统的调节是三个中药复方调节应激的重要途径之一.

针刀对第三腰椎横突综合征兔β内啡肽及脑啡肽含量的影响

目的 通过观察第三腰椎横突综合征兔外周和中枢β内啡肽(β-endorphin,β-EP)和脑啡肽(enkephalin,ENK)含量的变化,探讨针刀治疗第三腰椎横突综合征的镇痛机制.方法 选用清洁级日本大耳白兔30只,采用随机数字表法分为正常组、模型组、针刀组、电针组和针刀加电针组5组,每组6只.后4组采用在左侧第三腰椎横突部埋置明胶海绵的方法制作第三腰椎横突综合征模型,针刀组给予针刀干预,电针组给予电针双侧“委中”干预,针刀加电针组给予针刀和电针干预.造模后第28天进行取材,分别检测血浆、肌肉、脊髓和下丘脑中β-EP和ENK含量.结果 造模后,模型兔血浆和肌肉中β-EP和ENK含量较正常组升高,脊髓和下丘脑中β-EP和ENK含量较正常组降低,差异均有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01).各治疗组(针刀组、电针组、针刀加电针组)在治疗后,β-EP和ENK的含量均趋于正常,与模型组比较,肌肉中β-EP含量降低,下丘脑中β-EP及ENK含量升高,差异有统计学意义(P＜0.05).各治疗组间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 针刀和电针对外周和中枢的β-EP和ENK均有良性的调节作用,针刀较电针更具优势.

人干扰素和脑啡肽融合蛋白的表达和生物学活性

以INFα-m基因为模版,采用overlapping PCR技术构建甲硫氨酸脑啡肽干扰素表达质粒pBV220/Enk-/Met-INFα-m,转化大肠杆菌DH5α表达,产物以包涵体形式存在.包涵体经分离、变性、复性,然后经CM-Sepharose-FF、DEAE-Sepharose-FF离子交换层析和Sephacryal-HR100分子筛纯化,获得较纯的Enk-IFNα-m融合蛋白.生物活性检测表明,融合蛋白不仅具有干扰素的抗病毒、抗增殖、增强NK细胞功能的活性,而且具有脑啡肽的脑内镇痛作用.

大鼠脑干向面口部运动核的P物质能和脑啡肽能投射

目的观察大鼠脑干面口部运动核(三叉神经运动核、面神经核和舌下神经核)内P物质(SP)和亮氨酸脑啡肽(L-ENK)样阳性终末的中枢起源. 方法荧光金(FG)逆行追踪与SP样和L-ENK样免疫荧光组织化学染色相结合的双重标记技术. 结果将FG分别注入三叉神经运动核、面神经核或舌下神经核后,FG逆标神经元主要位于臂旁核簇、三叉上核、三叉神经感觉主核、脑桥和延髓网状结构、巨细胞网状核α部和延髓中缝核簇.上述结构内的部分FG逆标神经元呈SP样或L-ENK样阳性,这些双标神经元主要位于臂旁外侧核、延髓中缝核簇和巨细胞网状核α部. 结论含SP和L-ENK并向脑干面口部运动核投射的运动前神经元可能在面口部复杂而精细的运动调控中发挥重要作用.

脑啡肽对早期反应性胶质增生形态及其神经营养功能的影响

目的研究脑啡肽对早期反应性胶质细胞形态、增殖及神经营养功能的影响.方法在相差显微镜下观察反应性胶质细胞形态,3H-TdR掺入实验检测反应性胶质细胞增殖,以Griess反应测定亚硝酸盐含量表示一氧化氮(NO)量,原位杂交实验检测生长相关蛋白(growth associated protein,GAP-43)mRNA的表达.结果脑啡肽能促进损伤边缘的胶质细胞向损伤裸露区伸出宽大扁平的突起,增强反应性胶质细胞3H-TdR的掺入(P＜0.05),抑制其NO的生成(P＜0.05);经脑啡肽处理的反应性胶质细胞能增强神经元GAP-43mRNA的表达(P＜0.05).结论脑啡肽增强反应性胶质增生的同时抑制了反应性胶质细胞NO的生成而增强反应性胶质细胞的神经营养功能.

大鼠延髓孤束核吻侧段内脑啡肽阳性终末与γ-氨基丁酸阳性神经元联系的形态学研究

目的 观察大鼠孤束核吻侧段(rNTS)内脑啡肽阳性(ENK-ir)终末与γ-氨基丁酸(GABA-ir)阳性神经元之间的联系.方法 免疫荧光双重标记技术,包埋前免疫组织化学方法染色结合免疫金颗粒标记的电镜双标技术.结果 激光扫描共焦显微镜下可见rNTS内有大量的ENK-ir纤维和终末及散在的GABA-ir神经元.ENK-ir终末与GABA-ir神经元之间形成密切接触.在电镜下可见ENK-ir阳性产物主要定位于圆形清亮突触小泡及大颗粒囊泡表面.ENK-ir轴突终末与GABA-ir及阴性神经元胞体及树突之间形成对称性和非对称性的突触联系,以对称性突触为主.结论 rNTS内的ENK-ir终末可能通过抑制或增强GABA能神经元活性,或直接抑制味觉感受神经元活性的方式,参与NTS内味觉信息的感受和调节.

内吗啡肽与强啡肽产生协同镇痛作用的新证据

以往的工作表明,穴位电刺激产生镇痛作用是通过中枢神经系统释放一系列神经肽进行传递的[1～4].内吗啡肽(EM)是近年发现的一种μ阿片受体特异性激动剂,它的镇痛效应已被多次证明.但它与其它阿片肽是否有协同作用,尚待研究.以往的工作还证明,2Hz与100Hz以3秒的间隔交替出现(2/100Hz)可引起脑啡肽、EM与强啡肽(Dyn)先后释放,发挥协同作用.

δ阿片受体激动剂对脓毒症大鼠肝脏保护作用的研究

目的 探讨δ阿片受体激动剂DADLE(D-Ala2-D-Leu5-enkephali)对脓毒症大鼠肝脏的保护作用.方法 SD大鼠60只,分为假手术组(SO组)、脓毒症组(SEP组)和DADLE(5 mg/kg)给药处理组(DADLE组),每组20只.采用改良盲肠结扎穿孔方法(CLP)建立大鼠脓毒症模型,SO组除不结扎刺穿盲肠外,其余操作同SEP组,DADLE组模型建立后立即按5 ml/kg剂量静脉注射浓度为0.5 mg/ml的DADLE.制模8 h后处死大鼠,取血检测ALT和AST水平.采用Clark氧电极技术测定肝细胞线粒体呼吸功能,高效液相色谱法测定肝组织ATP、ADP、AMP含量.观察各组大鼠肝组织病理形态改变.结果 与SO组比较其余两组ALT和AST明显升高,而DADLE组与SEP组比有明显降低(P<0.05).给予DADLE治疗的大鼠呼吸控制率(RCR)、磷/氧化(ADP/O)与SEP组比较显著升高(P<0.05).组织病理学提示DADLE组大鼠肝脏组织坏死灶及炎细胞浸润明显轻于SEP组.结论 δ阿片受体激动剂DADLE对脓毒症大鼠肝脏具有一定的保护作用,其机制可能与保护线粒体呼吸功能,减轻线粒体水肿,改善肝细胞能量代谢有关.

背根神经节脉冲射频对坐骨神经分支结扎切断模型大鼠脊髓甲硫氨酸脑啡肽和P物质的影响

目的 对坐骨神经分支结扎切断模型(SNI)大鼠的背根神经节进行脉冲射频,通过放射免疫方法检测大鼠脊髓甲硫氨酸脑啡肽(M-ENK)、P物质水平;探讨背根神经节脉冲射频镇痛作用的可能机制,为临床应用提供理论基础.方法 清洁级SD大鼠48只随机分为6组:正常动物组,SNI痛模型组,SNI+假手术后2 h组,SNI+假手术后24 h组,SNI+脉冲射频后2 h组,SNI+脉冲射频后24 h组.分别于脉冲射频后2 h和24 h测定大鼠脊髓M-ENK、P物质的含量.结果 (1)SNI+脉冲射频后2 h大鼠脊髓M-ENK水平下降(P<0.01),24 h M-ENK水平上升(P<0.01);(2)与正常动物组相比,SNI术后各组大鼠脊髓P物质的含量上升(P<0.01);与SNI模型组、SNI+假手术组相比,SNI+脉冲射频后2 h及24 h组大鼠脊髓P物质的含量上升(P<0.01).结论 SNI模型后大鼠脊髓P物质的含量上升,脉冲射频可以增高大鼠脊髓M-ENK及P物质的表达水平.

聚乙二醇修饰甲硫氨酸脑啡肽静脉注射时对热板致痛小鼠的镇痛作用

目的探讨甲硫氨酸脑啡肽（ MEK）经不同分子量聚乙二醇（ PEG）修饰对热板致痛小鼠镇痛效果的改善作用。方法分别尾静脉注射31μmol/kg MEK-Cys-NH2、mPEG2000和mPEG5000修饰MEK-Cys-NH2，测定55℃热板致痛小鼠给药前和给药后15、30、60、120 min的痛阈值；以给药前后痛阈值的差值数据比较各受试物给药前后、给药后各时间点的差异，分析镇痛效果。结果尾静脉注射mPEG5000修饰MEK-Cys-NH2镇痛表现有强于并长于MEK-Cys-NH2和mPEG2000修饰MEK-Cys-NH2趋势，在给药后120 min时痛阈值高于MEK-Cys-NH2和阳性对照药吗啡（ P＜0.0）。结论适当相对分子质量PEG修饰MEK可提高镇痛强度和药效维持时间，对改善其成药性具有积极意义。

血浆内源性阿片肽与实验性肝硬变及腹水形成的作用

目的探讨血浆内源性阿片肽(Eop)在实验性肝硬变及腹水形成过程中的变化的意义.方法应用放射免疫法测定正常对照组及CCl4诱发大鼠肝硬变(n=37)及形成腹水(n=17)过程中血浆3种Eop的含量变化.结果肝硬变腹水组及肝硬变组血浆亮氨酸脑啡肽(L-ENK)含量均显著高于正常对照组(P均＜0.01),且都与血清清蛋白浓度呈显著负相关(r=-0.69,P＜0.01; r=-0.56,P＜0.01);与凝血酶原时间(PT)呈显著正相关(r=0.68,P＜0.01; r=0.69,P＜0.01). 同样两肝硬变组血浆强啡肽(DynA1-13)含量均显著高于正常对照组(P均＜0.01). 且与血清清蛋白浓度呈显著负相关(r=-0.64,P＜0.01; r=-0.59,P＜0.01),与PT呈显著正相关(r=0.65,P＜0.01; r=0.67,P＜0.01). 但两肝硬变组血浆L-ENK,DynA1-13与血ALT不相关. β-内啡肽(β-EP)的血浆含量在两肝硬变组及正常对照组中无显著差异.结论肝脏灭活功能受损是血浆小分子阿片肽(L-ENK与DynA1-13)含量升高的重要原因,后者又是实验性肝硬变腹水形成的主要原因之一. 而在β-EP体内灭活过程中,肝脏不起主要作用.

中性内肽酶在神经疾病中的病理生理作用

中性内肽酶(neural endopeptase,NEP)是一种含锌、含糖,分布普遍、底物广泛的金属蛋白酶,主要功能是水解肽链氨基端疏水氨基酸残基,作为突触酶或内肽酶降解灭活脑啡肽等肽类神经递质和心钠素等肽类激素[1].近年来采用基因工程技术,对NEP在神经疾病中的病理生理作用取得了重要的研究进展[2].

常氧与缺氧状态下脑啡肽和吗啡对兔肺动脉平滑肌增殖的调控作用

探讨常氧与缺氧状态下脑啡肽对兔肺动脉平滑肌增殖的调控作用及机制,为解决经皮腔内冠脉成形术(PTCA)支架后冠脉再狭窄问题提供新的理论依据.无菌取出新西兰白兔肺动脉段,在常氧和缺氧条件下按照 Ross贴片法培养平滑肌,采用相差显微镜、透射电镜和(-肌动蛋白抗体染色法鉴定平滑肌细胞,四唑盐比色法及3H-TdR参入实验检测平滑肌的生长状况.单纯缺氧明显促进平滑肌细胞的增殖;常氧和缺氧状态下脑啡肽显著抑制平滑肌的增生;吗啡对平滑肌的生长无明显影响;纳洛酮能拮抗常氧和缺氧状态下脑啡肽抑制平滑肌的增殖调控作用.PTCA支架后冠脉再狭窄的发生可能与PTCA支架后机体血浆中脑啡肽水平的降低和冠脉新生内膜平滑肌细胞的缺氧有关.

脑室内注射甲硫-脑啡肽对脾淋巴细胞增殖的影响

纳络酮对超重状态大鼠脑啡肽 强啡肽的影响

目的研究纳络酮对加速度作用后产生超重状态的大鼠脑组织中脑啡肽、强啡肽的作用及尾部痛阈的影响.方法将大鼠分为对照组、生理氯化钠溶液组和纳络酮组.分别施加+1加速度(+Gz)、高+Gz和±Gz(正、负加速度)交替的作用.作用后测定甩尾反射潜伏期和脑啡肽、强啡肽的含量.结果高+Gz和±Gz交替作用使二种肽类含量增多,痛阈增高;且±Gz交替作用明显.生理氯化钠组与对照组比较,无显著性差异;纳络酮组与对照组和生理氯化钠溶液组分别比较,二种肽类含量虽有所减少,但无统计学意义,大鼠尾部痛阈降低明显.结论高+Gz和±Gz交替作用使两种肽类含量增多,痛阈增高;且±Gz交替作用明显.纳络酮可以拮抗两种肽类的镇痛作用,并降低大鼠痛阈.

δ阿片受体激活对培养心肌细胞生长的影响

目的观测δ阿片受体激活对培养的心肌细胞是否有直接的促生长作用.方法体外培养乳大鼠心肌细胞.结晶紫法和[3H]TdR法测定心肌细胞的增生;流式细胞仪测定细胞周期百分比;Lowry等法测定培养细胞蛋白质含量;倒置显微镜下计数心肌细胞搏动频率.结果δ阿片受体激动剂D-丙(2)-D-亮(5)脑啡肽(DADLE)10 nmol·L-1～10 μmol·L-1能浓度依赖性促进细胞增殖,增加细胞蛋白质含量, 增加细胞搏动频率;高选择性δ阿片受体拮抗剂纳曲吲哚(naltrindole) 10 μmol·L-1对DADLE的促进作用有一定的抑制作用.结论δ阿片受体激活对体外培养的心肌细胞生长有促进作用.

甲硫氨酸脑啡肽对NIH 3T3细胞和人肝癌Bel 7402细胞生长具有抑制作用

目的:研究甲硫氨酸脑啡肽对体外培养的NIH3T3 细胞、人肝癌Bel7402细胞增殖的影响.方法:MTT微培养染色法检测不同质量浓度的甲硫氨酸脑啡肽对NIH3T3 细胞、人肝癌Bel7402细胞的作用以及一定质量浓度的纳洛酮、阿片δ受体单克隆抗体、5-氟脲嘧啶对这种作用的影响.结果:(1)10 mg.L-1至80 mg.L-1的甲硫氨酸脑啡肽对这2种细胞均有不同的抑制效应(NIH3T3 32%～66%与Bel7402 36%～64%);(2)纳洛酮能阻断甲硫氨酸脑啡肽对细胞抑制效应,阿片δ受体单克隆抗体没有这种阻断能力;(3)5-氟脲嘧啶(10 mg.L-1)和甲硫氨酸脑啡肽(50 mg.L-1)有协同作用.结论:甲硫氨酸脑啡肽能抑制细胞增殖.提示NIH3T3细胞和Bel 7402细胞胞膜上可能存在阿片ζ受体介导.

醒脑健神胶囊对实验性脑出血大鼠脑内脑啡肽(ENK)影响的实验研究

用免疫组织化学ABC方法观察中药醒脑健神胶囊对实验性脑出血大鼠脑内脑啡肽(ENK)的影响.结果发现,脑出血后1天、3天和7天脑内ENK样阳性纤维及终末的密度高于正常对照组,治疗组ENK样阳性纤维及终末的密度在脑出血后第1天和第7天比脑出血组低,但在第3天比脑出血组高.根据前人的研究和本实验结果,我们推测ENK可能参与了脑出血的病理生理过程.醒脑健神胶囊可调节脑内ENK的含量,减轻脑组织的损伤,使脑出血后某些神经症状得以改善.

电针对慢性炎症疼痛大鼠下丘脑ENK与脊髓OFQ含量的影响

目的 观察电针对炎症疼痛大鼠下丘脑脑啡肽(ENK)、脊髓孤啡肽(OFQ)含量的影响,探讨单穴电针治疗慢性炎症疼痛的机制.方法 将SD大鼠随机分为4组:正常组、模型组、针剌组、电针组,酶联免疫法检测大鼠下丘脑ENK与脊髓腰段OFQ的含量.结果 与正常组比,模型组大鼠下丘脑ENK与脊髓腰段OFQ的含量无明显升高(P＞0.05);单侧针刺组下丘脑ENK与脊髓OFQ含量比模型组升高(P＜0.01、P＜0.05),单侧电针组下丘脑ENK与脊髓OFQ含量比模型组升高(P＜0.01、P＜0.05).结论 单穴针刺与电针可缓解慢性炎症疼痛,其机制可能是与加强中枢ENK、OFQ的合成和释放有关.