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酶联免疫吸附试验定量检测人抗流行性乙型脑炎病毒IgG抗体方法的研究
为建立快速检测人抗流行性乙型脑炎(乙脑)病毒抗体的方法,用纯化乙脑病毒选择实验条件,通过与蚀斑减少中和试验(PRNT)的比较,确定保护性抗体的酶联免疫吸附试验(ELISA)的尺度,再对两种方法进行比较.结果:ELISA比PRNT法灵敏度高16～32倍.两种方法有良好的线性关系(r＝0.771,P＜0.001).PRNT法1∶10抗体滴度对应的ELISA结果为0.331U,两种方法差异无显著的统计学意义(χ2＝0.142,P＞0.05),总符合率为81.3%.
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麻疹IgG抗体定量检测酶联免疫吸附试验试剂的比较和评价
目的 对目前中国市场上已有的两种麻疹IgG抗体定量检测酶联免疫吸附试验(Enzyme-linkedImmunosorbent Assay,ELISA)试剂(德国Virion/Serion试剂和德国IBL试剂)进行比较和评价,筛选适用于2006年全国人群麻疹血清流行病学调查的试剂.方法 以蚀斑减少中和试验(Plague Reduction Neutralization Test,PRNT)的检测结果为"金标准",分别用两种ELISA试剂检测52份麻疹IgG抗体组合血清,然后对试剂的定性和定量能力进行全面分析和评价.结果 两种ELISA试剂均能正确的将13份PRNT结果为阴性的血清判定为阴性,特异度均为100%.两种试剂中,Virion/Serion试剂的敏感度为94.9%,与PRNT结果的相关性Kappa值为0.902,相关系数为0.878(P<0.01);IBL试剂敏感性为58.8%,与PRNT结果的相关性Kappa值为0.441,相关性系数为0.850(P<0.01).结论 Virion/Serion试剂的特异性、敏感性较好,有单孔IgG抗体定量能力,价格适中,适于在自动化工作平台工作站中开展大规模血清样本的检测.
关键词： 蚀斑减少中和试验 麻疹IgG抗体 定量酶联免疫吸附试验 -
冻干精制Vero细胞流行性乙型脑炎灭活疫苗在低流行区的人体反应及免疫效果
为了进一步观察冻干精制猴肾传代细胞(Vero细胞)流行性乙型脑炎(乙脑)灭活疫苗(Vero细胞乙脑疫苗)的接种反应及免疫效果,在乙脑的低流行区内蒙古自治区选择6～9岁未接种过乙脑疫苗的健康儿童为观察对象,分别接种Vero细胞乙脑疫苗、原代地鼠肾细胞(PHK)乙脑灭活疫苗和乙脑减毒活疫苗.结果显示:接种第1剂Vero细胞乙脑疫苗后体温中、强反应率为5.6%,未见局部及其它全身反应,接种第2剂后只有1人为中反应;用Vero细胞乙脑疫苗基础免疫2针后1个月,血清中和抗体阳转率和几何平均滴度(GMT)分别为100.0%和1∶25.30,显著高于PHK乙脑灭活疫苗的56.8%和1∶8.83,亦显著高于乙脑减毒活疫苗1针免疫后的60.7%和1∶8.35;用Vero细胞乙脑疫苗基础免疫2针1年后中和抗体阳性率及GMT分别为50.0%和1∶7.42,加强免疫后中和抗体阳性率为100.0%,GMT达1∶220.1,≥4倍增长率为95.1%,加强免疫前后差异显著.由此可见,用Vero细胞乙脑疫苗对学龄儿童进行基础免疫或加强免疫,是安全有效的.
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呼吸道合胞病毒抗体效价3种检测方法的建立及比较
目的 建立呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)抗体效价的3种检测方法,并进行比较.方法 棋盘滴定法优化ELISA法的包被抗原及酶标二抗的浓度,并检测该方法的线性范围及重复性;同时建立微量细胞中和试验法和蚀斑减少中和试验法,检测两种方法的重复性.用建立的3种方法及市售RSV抗体ELISA检测试剂盒同时检测55份健康人血清样本,并将两种ELISA法与两种中和抗体效价检测方法间的相关性进行两两比较.结果 ELISA法中包被抗原为10 μg/ml及HRP标记的山羊抗人IgG稀释度为1∶30 000时是佳组合;在38.00～2.375 U/ml范围内,抗体浓度与A450/630值呈良好线性关系,R2=0.981 4;高、中、低3个浓度样本的变异系数(CV)均＜10％.微量细胞中和试验7d后,细胞病变明显,细胞成片脱落;连续6次检测抗RSV多克隆抗体中和效价的CV值为4.2％.RSV感染Vero细胞7d后出现明显的蚀斑形态,结晶紫染色后蚀斑边缘清晰;连续6次检测兔抗RSV抗血清效价的CV值为6.81％.本实验建立的ELISA法与市售ELISA试剂盒的相关系数(R)为0.787,微量细胞中和试验与蚀斑减少中和试验的R为0.937.结论 成功建立了3种RSV抗体效价检测方法,本实验建立的ELISA法与市售ELISA试剂盒间及两种中和抗体检测方法间具有良好的相关性.
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应用蚀斑减少中和试验检测健康人血浆中抗乙型脑炎病毒中和抗体
目的应用蚀斑减少中和试验,检测健康人血浆中抗乙型脑炎病毒中和抗体水平.方法采用蚀斑减少中和试验.结果四川和重庆地区健康人血浆中98%以上含有抗乙型脑炎病毒中和抗体,其中10%的健康人血浆中该抗体滴度高达1:500倍以上.结论采用蚀斑减少中和试验方法用于健康人血浆中乙型脑炎病毒中和抗体测定是可行的.
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应用三种方法测定水痘病毒抗体滴度比较
水痘是儿童一种急性、高传染性疾病,建立水痘病毒抗体测定方法,对水痘血清流行病学调查、水痘疫苗免疫效果考核具有十分重要意义.作者应用蚀斑减少中和试验、间接免疫荧光试验和酶联免疫吸附试验,对22份健康人群血清和2份带状疱疹病人恢复期血清进行了VZV抗体测定.结果24份血清VZV中和抗体、荧光抗体、酶标抗体GMT分别为1:2.38、1:4.36和1:110.07,3种抗体GMT比值为1:1.83:46.25.此结果提示,蚀斑减少中和试验测定VZV抗体敏感性低,与荧光法接近,酶联免疫吸附试验的敏感性高.
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贵州省成人流行性乙型脑炎病毒中和抗体水平调查
目的 调查贵州省成人流行性乙型脑炎(乙脑)病毒中和抗体水平.方法 采用多阶段随机抽样的方法,在2017年5～6月采集3个市(州)6个年龄组健康成人血清共360份,应用蚀斑减少中和试验法检测乙脑病毒中和抗体.结果 360名调查对象中乙脑病毒中和抗体阳性率为55.28％,几何平均滴度(GMT)为1:17.52.不同性别(x2=10.798,P=0.001)、不同发病率地区(x2 =6.090,P=0.048)成人乙脑病毒中和抗体阳性率差异具有统计学意义(均有P＜0.05);不同年龄成人乙脑病毒中和抗体阳性率在45.00％ ～ 60.00％之间(x2=4.236,P=0.516);不同民族中,布依族成人乙脑病毒中和抗体阳性率高(79.17％).结论 贵州省成人乙脑病毒中和抗体水平较低,存在成人乙脑流行风险.
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水痘带状疱疹病毒蚀斑减少中和试验
[目的]建立水痘带状疱疹病毒中和抗体测定方法.[方法]用VZV1毒种制备中和抗原,以50pfu左右病毒量加待测血清36℃中和1h,接种Vero-E6单层细胞,烛缸法培养10d后,用结晶紫染色,计数pfu;以中和后pfu减少50%的血清高稀释度为中和抗体滴度.[结果]VZV1在Vero-E6细胞上形成的蚀斑呈椭圆形,平均φ0.85mm,边界清晰;经试验3只VZV1免前家兔血清中和抗体滴度<1:2,免后分别为1:16、1:31、1:64;5份中和抗体阳性血清经重复测试3次,中和抗体多相差1个滴度;24份血清同时测定VZV中和、荧光、酶标抗体的GMT比值为1:1.83:46.25.[结论]VZV蚀斑减少中和试验特异性、重复性良好,可用于VZV疫苗免疫效果考核.
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人抗乙脑病毒IgG抗体检测试剂盒的研制和应用
乙脑病毒SA14-14-2株疫苗原液经β丙内酯灭活Sepharose 4FF纯化后作为包被抗原,制备阳性替代品,应用间接ELISA法检测人血清中乙脑病毒抗体.建立内部质量控制血清标准,比较蚀斑减少中和试验(PRNT)与ELISA的相关性.检测46份乙脑相关血清的结果与国内同类试剂进行比较,阳性符合率为93.1%,阴性符合率为89.5%.在咸安地区3万多名2～14岁人群中进行乙脑病毒IgG抗体水平普查,阳性率22.5%,与国内同类试剂的符合率为95.7%,使用效果很好.
关键词： 间接ELISA 人抗乙脑病毒IgG抗体 蚀斑减少中和试验 阳性替代品 -
新生牛血清中乙脑抗体的检测及其方法的建立
对新生牛血清中的抗乙型脑炎病毒的抗体进行检测,并且建立一种有效可行的检测方法.以四个厂家共16批新生牛血清用蚀斑减少中和法(PRNT)对其中的乙脑抗体进行了检测.结果显示该方法检测出部分批次的新生牛血清中含有抗乙脑病毒抗体,且乙脑抗体阳性牛血清可将乙脑病毒抗原中和,对蚀斑数有较明显影响.证明作为检测牛血清中乙脑抗体的有效方法,PRNT法具有灵敏度高、重复性好的优点.以上检测说明新生牛血清中存在乙脑抗体,能将乙脑病毒中和.用于乙脑减毒活疫苗生产的新生牛血清除按照<中国生物制品主要原辅材料质控标准>进行质控外,还应进行乙脑抗体的检测.
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华东部分地区12岁以下儿童5型腺病毒感染状况调查——用于Ad5型重组载体疫苗或者基因治疗剂的适宜人群筛选
目的 调查12岁以下儿童腺病毒(adenovirus,Ad)感染所诱发的免疫力状况,尤其是针对5-型腺病毒(Ad5)的免疫力状况,旨在筛选应用Ad5重组疫苗和基因治疗剂的适宜人群.方法 通过采集华东部分省市和地区12岁以下儿童的血清标本,采用ELISA方法检测Ad非特异性总抗体(Ad Total antibody,Ad-TAb),用蚀斑减少中和试验(Plague Reduction Neutralization Test,PRNT)来检测Ad5中和抗体(Ad5 neutralizing antibody,Ad5-NAb),用Stata 9.0软件进行数据分析.结果 经过ELISA和PRNT检测,发现Ad-TAb和Ad5-NAb的滴度水平以及各组标本的阳性率,均随着年龄的增长而呈上升的趋势.以低于2岁的年龄组各项数据低,与其它各组有显著性差异(P<0.05).结论 在12岁以下儿童人群中,以低于2岁的年龄组应用Ad5型重组疫苗或基因治疗剂是可行的.
