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弓形虫ROP11核酸疫苗免疫保护作用的研究
目的 观察ROP11核酸疫苗对BALB/c小鼠的免疫保护作用. 方法 40只BALB/c小鼠随机分为实验组、空质粒对照组、PBS对照组和空白对照组,每组10只,均通过股四头肌注射免疫小鼠.其中实验组每鼠注射pcDNA3.1(+) ROP11重组质粒100 μg(1 μg/μl),空质粒对照组注射pcDNA3.1(+)质粒100 μg(1μg/μ1),PBS对照组注射无菌PBS缓冲液100μl,空白对照组不注射.共免疫3次,每次间隔2周,末次接种量均加倍.分别于每次注射前和末次注射后第2周检测小鼠血清特异性IgG和细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10.末次注射后2周各组小鼠腹腔攻击感染RH株弓形虫速殖子1×10 3个/只,观察其存活时间,评价免疫效果. 结果 ROP11核酸疫苗能诱发小鼠产生细胞免疫和体液免疫反应,实验组小鼠血清特异IgG随着免疫次数的增加而显著增高(P＜0.05).血清IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10均不同程度升高(P＜0.05).重组质粒免疫组、空质粒免疫组、PBS和空白对照组小鼠经RH株弓形虫攻击感染后的平均存活时间为236.3、97.8、96.3和96.2h,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 ROP11核酸疫苗对BALB/c小鼠弓形虫感染有一定的免疫保护性,为进一步研究ROP11核酸疫苗的生物学功能提供了实验基础.
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刚地弓形虫ROP11基因的克隆及生物信息学分析
提取刚地弓形虫(Toxoplasma gondii) RH株速殖子总RNA,根据棒状体蛋白11(ROP11)全长编码序列(登录号为DQ077905)的开放阅读框设计引物并进行逆转录PCR (RT-PCR)扩增,PCR产物经EcoR Ⅰ和NotⅠ酶切后与原核表达载体pGEX-6P-2连接,重组质粒转化大肠埃希菌(E coli) XL-Blue,阳性菌落经PCR和双酶切鉴定,并测序.对所得序列进行生物信息学分析.结果显示,RT-PCR扩增产物约为1 500 bp.菌落PCR及双酶切结果正确.测序结果显示,获得的ROP11基因片段为1 548 bp(登录号为KC456639),与GenBank上已有的弓形虫ROP11序列相比,序列一致性为99％.生物信息学分析发现,ROP11编码蛋白质的预期相对分子质量为Mr 57 020,包括有12个保守结构区域,其前26个氨基酸残基构成信号肽,丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶催化区域位于170～511氨基酸,且有2个潜在的N-糖基化位点.
