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免疫途径和佐剂对NTHiP6蛋白疫苗免疫效果的影响
目的 观察不同免疫途径和佐剂对NTHiP6蛋白疫苗免疫效果的影响.方法 将原核表达质粒PGEX-6P2/P6转入E.coli XL1-Blue,IPTG诱导P6蛋白的表达并进行纯化.以不同免疫途径(皮下,腹腔,滴鼻)用P6蛋白免疫小鼠,每组12只.然后另取小鼠分为PBS组和不同佐剂组(MDC、IL-2、弗氏佐剂),每组15只,采用皮下注射途径免疫.共免疫3次,间隔2周,用ELISA检测小鼠血清特异性IgG抗体,用CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖活性,用ELISA检测IL-4和IFN-γ水平.结果 在大肠埃希菌中成功表达P6蛋白.3种免疫途径相比,皮下途径免疫诱导的IgG抗体滴度为1 279.97±3.87,腹腔免疫组为427.16±3.08,滴鼻免疫组为253.98±3.30,差异有统计学意义(F=5.43,P＜0.05).采用皮下免疫途径时,MDC组诱导的IgG抗体滴度、IL-4水平分别为7 421.02±3.30和79.64±2.75,与其他组比较差异有统计学意义(P＜0.05).IFN-γ水平和脾淋巴细胞增殖指数与IL-2组相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 使用MDC佐剂并采用皮下途径注射可使NTHiP6蛋白疫苗获得较好的免疫效果.
关键词： 不可分型流感嗜血杆菌 P6蛋白 佐剂 免疫途径 -
不同佐剂及免疫途径对重组NTHi外膜蛋白P6免疫效果影响的研究
目的 研究几种佐剂及免疫途径对重组NTHi P6蛋白抗原在小鼠体内产生的免疫效果的影响.方法 以A1(OH),佐剂、CpG ODN佐剂以及两种联合的复合佐剂分别与rP6蛋白混合,经滴鼻、肌肉注射免疫途径免疫6周龄雌性BALB/c小鼠;相同剂量、免疫途径加强免疫2次.采用ELISA法检测rP6蛋白特异的血清IgG和黏膜IgA滴度;酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测特异性T淋巴细胞的活化.结果 3次免疫后,CpG ODN+rP6滴鼻免疫组和A1(OH)3+CpG ODN+rP6肌肉注射免疫组产生高滴度的特异性血清IgG抗体(F=41.259,P=0.000).同时ELISPOT试验显示,CpG ODN+rP6无论通过滴鼻还是肌肉注射免疫均能诱导大量抗原特异性T淋巴细胞的活化,与其他实验组比较差异有统计学意义(F=66.046,P=0.000).而且CpG ODN+rP6滴鼻免疫组能诱发高滴度的特异性黏膜IgA抗体(F=70.966,P=0.000).结论 重组NTHi外膜蛋白P6与CpG ODN佐剂联合后经黏膜途径免疫,小但能保证体液免疫的高滴度血清IgG抗体,而且能从黏膜免疫和细胞免疫两方面对该蛋白的免疫效果进行增强.
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不可分型流感嗜血杆菌P6 DNA疫苗与蛋白疫苗序贯免疫效应研究
观察不可分型流感嗜血杆菌P6 DNA疫苗初免蛋白疫苗加强免疫方式的免疫效果.大量扩增pcDNA3-P6.将65只BALB/c小鼠随机分PBS对照组、pcDNA3.1对照组、pcDNA3.1-P6组、P6蛋白组、pcDNA3.1-P6/P6蛋白组,分别于0、14、28 d免疫.质粒每次每只接种100 μg,蛋白每次每只接种10 μg.末次免疫后14 d,每组取10只小鼠取血,ELISA检测血清中特异性IgG抗体滴度.每组取3只小鼠处死,制备脾淋巴细胞,ELISA检测IL-4和IFN-γ水平,CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖指数.用15LDs0NTHi攻击每组剩余10只小鼠,观察免疫保护作用.结果:pcDNA3.1-P6/P6蛋白组小鼠的脾淋巴增殖指数和IFN-γ水平明显高于质粒组和蛋白组(P＜0.05).pcDNA3.1-P6/P6蛋白组小鼠IgG抗体滴度、IL-4水平和动物生存率明显高于质粒组(P＜0.05)但和蛋白组相比无明显差异(P＞0.05).因此pcDNA3.1-P6初免P6蛋白加强免疫的方式可以提高疫苗的免疫效果.
关键词： 不可分型流感嗜血杆菌 P6蛋白 质粒 -
巨噬细胞源性趋化因子对NTHiP6蛋白疫苗免疫效果的影响
观察巨噬细胞源性趋化因子(MDC)佐剂对NTHiP6蛋白疫苗免疫效果的影响.将原核表达质粒PGEX-6P2/P6转入E.coli XL1-Blue,IPTG诱导P6蛋白的表达并进行纯化.将BALB/e小鼠随机分为A-D四组,分别为PBS对照组、MDC对照组、P6蛋白组、P6蛋白联合MDC组.分别于0、14、28 d经黏膜免疫,末次免疫后14d,每组12只小鼠取血和肺泡灌洗液,ELISA检测血清中IgG抗体和肺泡灌洗液中IgA抗体水平.每组取3只小鼠,制备脾淋巴细胞,ELISA检测IL-4、IL-17和IFN-γ水平.用10LD50NTHi攻击每组剩余15只小鼠,观察免疫保护作用.在大肠杆菌中成功表达P6蛋白.第三次免疫后,D组诱导的IgG抗体、IgA抗体、IL-4、IL-17和IFN-γ水平显著高于其他各组(P＜0.05).经NTHi攻击后,D组生存率达80％,与A组、B组相比差异有统计学意义(P＜0.05),但C组、D组之间无显著性差异(P＞0.05).MDC作为佐剂可以使NTHiP6疫苗获得较好的免疫效果.
关键词： 不可分型流感嗜血杆菌 P6蛋白 巨噬细胞源性趋化因子 黏膜免疫 -
不同佐剂对不可分型流感嗜血杆菌P6蛋白疫苗免疫效果的影响
不可分型流感嗜血杆菌(nontypeable Haemophilus influenzae,NTHi)是一种在人群中携带率很高的病原菌,常引起呼吸道反复感染及中耳炎和鼻窦炎等严重感染性疾病[1].NTHi的耐药性不断增强[2-5],临床治疗难度不断加大.目前尚无有效的预防方法.P6蛋白是NTHi高度保守的外膜蛋白,且P6蛋白可诱导机体产生保护性抗体[6-7],但其免疫效果不强.白细胞介素17(interleukin 17,IL-17)是CD4+T细胞亚群Th17细胞分泌的细胞因子,可以诱导趋化因子的增加,促进树突状细胞的成熟,提高T细胞、B细胞的免疫应答.故本研究选择IL-17作为佐剂,以期提高P6蛋白的免疫效果.由于本课题组前期以巨噬细胞源性趋化因子(macrophage-derived chemokine,MDC)和IL-2作为佐剂在一定程度上增强了NTHiP6疫苗的免疫效果[8-10],本研究中我们比较了3种佐剂的免疫效果.
关键词： 不可分型流感嗜血杆菌 P6蛋白 佐剂 小鼠 -
小鼠巨噬细胞源性趋化因子作为佐剂增强不可分型流感嗜血杆菌P6蛋白疫苗的免疫保护作用
目的 用原核细胞表达不可分型流感嗜血杆菌(NTHi) P6蛋白并观察巨噬细胞源性趋化因子(MDC)对NTHi-P6蛋白疫苗免疫效果的影响.方法 构建原核表达质粒PGEX-6P2/P6,转化E.coli XL1-Blue,诱导P6蛋白的表达.将BALB/c小鼠随机分为P6蛋白联合Freund佐剂与MDC组、P6蛋白联合Freund佐剂组、PBS对照组.分别于0、14、28 d经腹腔免疫,末次免疫后14 d,每组取12只小鼠取血,ELISA检测血清中IgG抗体水平.每组取3只小鼠,制备脾淋巴细胞,ELISA检测IL-4和IFN-γ水平.用10×LD50 NTHi攻击每组剩余15只小鼠,观察免疫保护作用.结果 P6蛋白联合Freund佐剂与MDC组、P6蛋白联合Freund佐剂组均能诱导小鼠产生IgG抗体,其滴度分别为1∶1 140.25、1∶3 044.38,P6蛋白联合Freund佐剂与MDC组小鼠抗体滴度和IFN-γ水平明显高于P6蛋白联合Freund佐剂组(P＜0.05),但IL-4水平2组间差异无统计学意义(P＞0.05).经NTHi攻击后,P6蛋白联合Freund佐剂与MDC组小鼠的生存率达80％,与PBS组相比差异有统计学意义(P＜0.05),但与P6蛋白联合Freund佐剂组相比无显著性差异.结论 MDC作为蛋白佐剂,在一定程度上增强了NTHi-P6蛋白疫苗的免疫保护作用.
关键词： 不可分型流感嗜血杆菌 P6蛋白 巨噬细胞源性趋化因子 小鼠
