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nudC基因文献资料
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应用dsRNA介导的RNAi对烟曲霉菌生命必须基因的研究
目的 初步探讨应用RNAi研究烟曲霉菌必须基因的方法.方法 液氮研磨烟曲霉菌,提取总mRNA,用含T7启动子序列的特异引物进行RT-PCR,扩增出两端含T7启动子序列的nudC基因,以此为模版使用MEGAscriptTM RNAi Kit体外转录合成dsRNA,用合成的dsRNA电转化烟曲霉菌后,观察烟曲霉菌表型变化,对转化菌进行RT-PCR,分析mRNA变化.结果 电转化后,转化菌的nudC基因mRNA水平降低,与18srRNA的比值为0.50±0.07,显著低于零对照1.09±0.06和无关对照1.10±0.09(F=9.38,P＜0.05);烟曲霉菌生长受到抑制,类似基因敲除的表型.结论应用dsRNA介导的RNA能沉默烟曲霉菌靶基因,产生类似基因敲除的表型,为研究靶基因功能,识别烟曲霉菌生命必须基因,寻找新的抗菌药物作用靶位奠定了良好的基础.
