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实时荧光定量PCR对结核病潜伏感染快速诊断的研究
目的 探讨7种细胞因子的mRNA表达水平作为诊断结核分枝杆菌潜伏感染生物标志物的可能性. 方法 健康对照64人,活动性肺结核50人,结核分枝杆菌潜伏感染60人,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结核特异性抗原刺激的外周血中TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-10、IFI35、CXCL10及Foxp3的mRNA表达水平. 结果 7种因子相对表达量在活动性肺结核组分别为2.33±0.09、4.94±0.45、150±17.82、2.02±0.55、9.53±5.96、5.56±0.97、1.24±0.17,潜伏感染组分别为3.2±0.61、10.04±1.89、202±17.6、21.89±10.25、29.17±11.19、41.35±11.46、2.14±0.67,健康组分别为1.2±0.08、2.92±0.03、53±17.82、1.48±0.17、1.28±0.77、1.63±0.25、1.03±0.67.潜伏感染组与健康组相比7种细胞因子的mRNA表达水平,差异均有统计学意义(P＜0.01),相应细胞因子检测的敏感性、特异性分别为95.1％、82.5％,92.5％、88.7％,91.9％、90.1％,88.2％、51.5％,74.2％、61.2％,81.8％、73.4％和80.4％、51.3％;潜伏感染组和活动性结核组比较除IFI35因子外,其余6种细胞因子的mRNA表达水平差异均有统计学意义(P＜0.05),相应细胞因子检测的特异性、敏感性分别为90.6％、80％,88.6％、92.7％,91.9％、86.2％,57.6％、60％,50％、58％,76％、72.2％和66.7％、67.1％;健康对照组和活动性结核组相比较,7种细胞因子的mRNA表达水平差异均有统计学意义(P＜0.01),相应细胞因子检测的敏感性、特异性分别为92.3％、90％,88.6％、86.7％,94.4％、86.7％,89.7％、65.8％,82.4％、63.3％,88.2％、70％和92.9％、72.1％.结核病密切接触者潜伏感染率为48.97％,健康组潜伏感染率为36％. 结论 结核病患者血清TNF-α、IFN-γ、IL-2 mRNA水平升高,以潜伏感染者升高更显著,因此可作为诊断结核分枝杆菌潜伏感染的生物标志物.
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脑缺血-再灌注损伤后S100A8的表达及意义
目的 探讨脑缺血-再灌注(I/R)损伤后S100A8的表达变化及其与Toll样受体4(TLR4)的关系.方法 TLR4基因突变型小鼠C3H/HeJ(n=30)随机(随机数字法)分为模型组(n=18)和健康组(n=12),TLR4野生型小鼠C3H/HeN (n =30)随机分为模型组(n=18)和健康健康组组(n=12),采用线栓法制造局灶性脑缺血-再灌注损伤模型,再灌注12 h后进行神经功能缺损评分,通过TTC染色和HE染色评价各组脑组织损伤程度,实时定量PCR技术和免疫荧光成像检测各组S100A8 mRNA和蛋白的表达.结果 与C3H/HeN模型组比较,脑缺血-再灌注损伤12h后,C3H/HeJ模型组神经缺损评分明显减小(P＜0.01),脑梗死体积和神经细胞损伤程度也明显减轻(P＜0.01).与健康组比较,C3 H/HeJ和C3H/HeN模型组梗死侧脑组织中S100A8mRNA和蛋白表达显著上调,且C3H/HeN模型组脑组织中S100A8表达量较C3H/HeJ模型组增加更为明显(P＜0.01),提示S100A8表达与TLR4关系密切.结论 S100A8很有可能通过与TLR4相互作用在脑I/R炎症损伤早期过程中发挥重要作用.
