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43 ku抗原基因文献资料
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云南猪株旋毛虫43ku抗原基因的原核表达
目的 构建云南猪株旋毛虫43 ku抗原基因原核表达载体,诱导其表达目的蛋白,为研究其功能奠定基础.方法 收集云南株旋毛虫成虫,提取总RNA,采用RT-PCR获得43 ku抗原基因.将PCR产物插入克隆载体pMD18-T中,重组质粒经酶切、PCR及测序鉴定正确后,将目的片段插入原核表达载体pET20b中并转化大肠埃希菌BL21,通过IPTG诱导表达目的蛋白,经镍柱亲和层析纯化后进行SDS-PAGE鉴定. 结果 RT-PCR扩增出云南猪株旋毛虫43ku抗原基因,其基因序列全长1 134 bp,与GenBank中注册的序列同源性高为98.8％.重组表达质粒pET20b-Ts43经双酶切得到1 000 bp和3 700 bp左右两条片段,与预期结果相符.表达产物经SDS-PAGE鉴定,其分子质量单位为43 ku.纯化蛋白经SDS-PAGE分析为单一43 ku蛋白带. 结论 成功构建了云南猪株旋毛虫43 ku抗原基因的原核表达载体,表达并纯化了43 ku蛋白,为其功能研究奠定了基础.
