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新生儿科产NDM-1耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌主动外排泵基因acrA的研究
目的 研究主动外排泵基因arcA在耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌中抗生素转录水平,探讨主动外排机制在耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌中的作用. 方法 收集2012年8月-2013年12月中南大学湘雅二医院新生儿科患者的痰及血液标本分离的7株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌株作为实验组,10株同一新生儿科碳青霉烯类敏感肺炎克雷伯菌株作为对照组,采用Phoenix100全自动微生物分析系统进行鉴定及药敏检测,采用KB法和Etest进行表型确认,采用改良Hodge确证试验确定细菌耐药表型,采用RAPD技术检测细菌基因型,采用PCR扩增NDM-1 、acrA基因,采用RT PCR检测acrA mRNA表达. 结果 7株试验菌均产碳青霉烯酶.PCR扩增显示其染色体和质粒上均携带NDM-1基因;RAPD显示 7株试验菌为同一 ST17型;5株试验菌和8株敏感菌株检出外排泵基因acrA;RT-PCR显示试验组和对照组acrA mRNA表达水 平均值分别为0.545和1.899,两组arcA mRNA扩增产物电泳条带与16S rRNA扩增产物电泳条带的灰度比值分别为0.13和0.317,结果进行Fisher精确概率检验,P=0.317>0.05,差异无统计学意义. 结论 acrA的表达可能不是产NDM 1耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌耐药的必要原 因.
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AcrAB外排泵ramA对肺炎克雷伯菌耐喹诺酮类药物的影响
目的 探讨AcrAB外排泵调控基因ramA对肺炎克雷伯菌耐喹诺酮类药物的影响.方法 用喹诺酮类药敏纸片扩散法、MIC及其逆转实验和有机溶剂耐受实验测定细菌耐药表型,用PCR扩增外排泵结构基因acrA、acrB、tolC及调控基因acrR,ramA,marA,用半定量PCR 检测调控基因的转录水平.结果 泵的结构基因和调控基因均存在43株KP菌中.仅喹诺酮类耐药株与敏感株ramA转录水平存在统计学差异(P<0.05).和对照组相比,高表达ramA的 AC-1株,其泵结构基因的转录水平增高,耐药表型也有明显改变,用泵抑制剂后,其喹诺酮类的MIC恢复对照水平.结论 ramA是KP菌耐喹诺酮类抗生素的一个重要因素.抑制ramA的表达,有助于治疗多重耐药肺炎克雷伯菌的感染.