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基于MALDI-TOF MS的弧菌识别能力分析
目的 确定基质辅助激光解析飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)-Biotyper系统对弧菌属细菌的识别能力.方法 采用Bruker Microflex LT系统,通过构建30株弧菌的肽质量参考谱库、完善Biotyper数据库;采用77株弧菌对数据库的识别能力进行评价;采用主谱图预测聚类分析揭示其对弧菌属、种水平的区分能力及肽质量谱与菌株毒力的相关性. 结果 107株弧菌通过MALDI-TOF MS-Biotyper原数据库系统鉴定,92.5％(99株)为属水平识别,55.1％(59株)为种水平识别.用于外部验证的77株菌搜索Biotyper原数据库和补充完善后的数据库,种水平识别率从53.2％提高至96.1％,提高42.9％;属水平识别率从92.2％提高至100％,提高7.8％;聚类分析显示弧菌属中麦氏弧菌与溶藻弧菌、弗尼斯弧菌肽质量谱特异性差,是造成识别错误的主要因素;聚类信息显示,肽质量谱与霍乱弧菌的产毒性不相关,与副溶血性弧菌毒力不相关. 结论 MALDI-TOF MS-Biotyper系统可用于弧菌属、种水平的快速识别.数据库的完善程度是决定种水平识别能力的关键.
关键词： 基质辅助激光解析飞行时间质谱 弧菌 识别能力 特异性 -
基质辅助激光解析飞行时间质谱在临床病原菌检测中的应用进展
近年来质谱仪技术有了快速的发展.20世纪80年代,基质辅助激光解析飞行时间质谱( matrix assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)的诞生,奠定了基于蛋白质指纹图谱鉴定微生物的硬件基础.每种微生物都有自身独特的蛋白质组成,质谱仪具有测定荷电离子质量的能力,可测得待检微生物的蛋白质质量指纹图谱,经软件对这些指纹图谱进行处理并和数据库中各种已知微生物的标准指纹图谱进行比对,即可以完成对微生物的鉴定.由于测定的图谱中主要的分子离子峰为菌体内高丰度,且表达稳定、进化保守的核糖体蛋白,因此这一方法不仅鉴定结果可靠,而且还可以通过聚类分析获得微生物间的进化和亲缘关系.
关键词： 基质辅助激光解析飞行时间质谱 病原菌检测 应用进展 -
脑梗死肝阳化风证与阴虚风动证蛋白质组学比较研究
目的 建立脑梗死肝阳化风证与阴虚风动证血清双向凝胶电泳图谱,初步分析其差异蛋白质表达情况.方法 双向凝胶电泳(2-DE)分离脑梗死肝阳化风证与阴虚风动证血清标本,考马斯亮兰染色,PD-QUEST图像分析系统分析,从凝胶中选取分离较好的蛋白质点,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析获取肽质量指纹图谱(PMF),Mascot软件搜索SWISS-PROT数据库鉴定蛋白质,对差异蛋白质进行组间对比.结果 获得了分辨率较好的脑梗死肝阳化风证与阴虚风动证双向凝胶电泳图谱,质谱分析了29个差异蛋白质点,获取了87张肽质量指纹图谱,通过查询数据库鉴定了29个蛋白质,其中部分蛋白质与肝阳化风证及阴虚风动证发生发展有关.结论 建立了脑梗死肝阳化风证与阴虚风动证血清双向凝胶电泳图谱,并应用质谱技术鉴定了部分差异蛋白质点,为脑梗死肝阳上亢证与阴虚风动证与正常组血清双向凝胶电泳图谱血清蛋白质组数据库的建立提供了有意义的数据,并认为蛋白质组学能在脑梗死不同证型具有代表意义.
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泌尿道解葡萄糖苷棒状杆菌的分离、鉴定和药敏分析
目的:对临床分离的解葡萄糖苷棒状杆菌进行鉴定和药敏分析,为临床用药提供参考.方法:将从我院泌尿系统结石致尿路感染患者中段尿标本中分离得到的2株菌株接种至哥伦比亚血平板和麦康凯平板上,观察其生长情况并计数;采用基质辅助激光解析飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)检测菌株的蛋白质谱图;提取菌株DNA,采用聚合酶链反应扩增其16S核糖体RNA(rRNA)序列,对片段大小约为1500 bp的目标条带进行双向测序,并与GenBank数据库进行Blast比对,鉴定菌种;采用Etest法监测2株菌株的耐药情况.结果:2株菌株在哥伦比亚血平板上生长(菌落数＞105CFU/mL),在麦康凯平板上不生长;均为革兰氏阳性棒状杆菌,多呈栅栏样或八字形排列.MALDI-TOF-MS鉴定其均为解葡萄糖苷棒状杆菌,可信度为99. 9％,在m/z2431、3089、3364、3378、4200、5508、6302、6637、6730、6946、12603处出现特征峰;Blast比对结果显示,2株菌株与 GenBank中已知解葡萄糖苷棒状杆菌的序列同源性超过98％.药敏试验结果显示,菌株1对头孢曲松、环丙沙星耐药,对青霉素G等其他14种抗菌药物敏感;菌株2对头孢曲松、红霉素、环丙沙星、四环素、克林霉素耐药,对头孢噻肟中介,对其他10种抗菌药物敏感.结论:2株菌株均为解葡萄糖苷棒状杆菌,对常用抗菌药物的耐药性有所差异.该菌为罕见的泌尿道病原菌,且呈多重耐药,临床应根据菌株鉴定及药敏试验结果合理选用抗菌药物.
关键词： 尿路感染 解葡萄糖苷棒状杆菌 基质辅助激光解析飞行时间质谱 鉴定 药敏试验
