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靶向抑制晶状体上皮细胞增殖的载药毫微球的研究
采用碳二亚胺法使抗人晶状体上皮细胞单克隆抗体与聚乳酸载5-氟尿嘧啶毫微球偶联,制备出抗人晶状体免疫毫微球.以牛血清白蛋白作乳化剂采用复乳法制备聚乳酸载5-氟尿嘧啶毫微球,使毫微球表面吸附牛血清白蛋白,再将抗人晶状体上皮细胞单克隆抗体与聚乳酸载5-氟尿嘧啶毫微球偶联.采用扫描电镜和透射电镜观察微球形貌和结构,用动态光散射粒径分析仪测载药毫微球粒径.ELISA法检测偶联后的抗体活性,MTT法检测免疫毫微球对晶状体上皮细胞的抑制作用,间接免疫荧光法检测该免疫毫微球与晶状体上皮细胞的特异性结合能力和细胞内化过程.结果显示载药毫微球表面光滑,平均粒径为191.0±0.202nm,其载药率为8.2%,药物利用率为24.6%.免疫载药毫微球中的单克隆抗体HILE6保留达到原免疫活性84%,24h对兔晶状体上皮细胞抑制率可达68.42%.该免疫载药毫微球能与晶状体上皮细胞特异性结合, 30min后可吸附到晶状体上皮细胞上,在4h内进入细胞质后进入细胞核.该实验为特异性抑制晶状体上皮细胞增殖,预防白内障术后并发症-后囊混浊提供了重要的科学依据.
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三氧化二砷免疫毫微球的制备及鉴定
目的 制备单抗CD33导向的三氧化二砷免疫蛋白毫微球(CD33-As2O3-BSA-NP)并检测其特异性结合APL原代细胞的活性.方法 通过N-羟基琥珀酰亚胺基-3-(2-吡基二硫)-丙酸酯(SPDP)交联的方法制备免疫蛋白毫微球.玻片凝集实验、免疫荧光法、光镜和电镜、CD33-As2O3-BSA-NP结合的CD33数量测定、检测As2O3免疫毫微球的共价连接与活性.结果 CD33-As2O3-BSA-NP的玻片凝集反应,免疫荧光染色均为阳性;光镜下可看见细胞周围结合微球,电镜下可看见细胞伸出伪足紧密地与免疫毫微球结合在一起;每1 g CD33-As2O3-BSA-NP表面偶联的CD33抗体数量是14.5 mg.结论 制备的CD33-As2O3-BSA-NP由共价键连接且特异性的结合APL原代细胞.
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As2O3免疫毫微球对急性早幼粒细胞白血病 NB4细胞的特异性杀伤作用
目的:验证单克隆抗体CD33导向的三氧化二砷免疫毫微球(CD33-As2O3-BAS-MS)对急性早幼粒细胞白血病NB4细胞的特异性杀伤作用.方法:通过光镜和电镜鉴定单克隆抗体CD33与毫微球的共价连接,用MTT比色分析法、苔酚蓝染色、3H-YDR掺入法检测CD33-As2O3-BAS-MS的细胞杀伤活性,流式细胞计数法测定细胞凋亡与分期.结果:先镜下可见NB4细胞周围结合免疫毫微球,电镜下可见NB4细胞伸出伪足紧密地与免疲毫微球结合在一起;MTT比色分析法、苔酚蓝染色、3H-TDR掺入法进一步验证了免疫毫微球特异性杀伤NB4细胞的活性.肿瘤细胞被诱导凋亡,GO/G1期细胞百分比减少,G2/M期百分比明显增加.结论:CD33-As2O3-BAS-MS能特异性杀伤急性早幼粒细胞白血病细胞系NB4细胞.
关键词： 三氧化二砷 免疫毫微球 急性早幼粒细胞白血病 NB4细胞 -
制备单抗偶联载阿霉素白蛋白免疫毫微球的初步研究
目的:制备阿霉素牛血清白蛋白纳米粒(DOX-BSA-NP),观察其形态、粒径及药物缓释规律;制备并初步鉴定甲胎蛋白(AFP)单抗导向阿霉素白蛋白免疫毫微球(antiAFP- DOX-BSA-NP).方法:以阿霉素、牛血清白蛋白为材料,采用去溶剂化法制备DOX-BSA-NP;使用电镜技术观察其形态及颗粒大小;采用胰蛋白酶消化方法测定其载药量和包封率,测定体外释药性质.采用SPDP交联法制备单抗导向的载阿霉素免疫毫微球,使用电镜技术观察其形态及颗粒大小,凝胶电泳测定共价连接.结果:(1) DOX-BSA-NP呈圆球状,外观呈红色;粒径大小均匀,载药量约为1.8%,包封率为90.3%,体外释药持续缓慢,第7天时,累积释药分数达到95%.(2) 采用SPDP交联方法制备的antiAFP-DOX-BSA-NP呈球形,粒径330~400 nm.结论:采用去溶剂化法可制备出具有缓释效果的阿霉素白蛋白微球;SPDP方法可以将单克隆抗体与载药微球连接制备出具有免疫功能的毫微球.
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索拉非尼免疫毫微球的制备及其抗肝癌效果的实验研究
目的：制备抗人肝癌抗体与索拉非尼偶联免疫毫微球，观察其特性及抗肝癌效果。方法通过异型双功能交联剂SPDP，将抗人肝癌单克隆抗体HAb18与索拉非尼（sorafenib, SAF）人血清白蛋白毫微球[HSA（SAF）-NS]偶联，制成抗人肝癌抗体与索拉非尼偶联免疫毫微球HAb18-HSA（SAF）-NS，使用凝集试验检测其活性，光镜和电镜下观察其与人肝癌细胞株SMMC-7721特异性结合。MTT法检测该免疫毫微球的体外杀伤性。于人肝癌裸鼠模型上分别使用HAb18-HSA （SAF）-NS、HSA （SAF）-NS及SAF，检测三者的肿瘤抑制率。结果 HAb18-HSA（SAF）-NS具有单抗活性，能与肝癌细胞特异结合；其体外杀伤SMMC-7721细胞IC 50值为42.4μg/mL，与HSA （SAF）-NS （368.9μg/mL）及SAF （377.5μg/mL）相比，明显降低；体内肿瘤抑制率比HSA（SAF）-NS及SAF显著增强（P<0.001）。结论 HAb18-HSA （SAF）-NS具有免疫活性，对肝癌细胞有主动靶向性，体内外均具有比HSA（SAF）-NS及SAF更强的抗癌效果。
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抗人肝癌免疫毫微球的制备及其抗癌效果观察
目的 制备抗人肝癌免疫毫微球,观察其活性及抗癌效果.方法 抗人肝癌单克隆抗体HAb18通过异型双功能交联剂SPDP与载阿霉素(ADR)人血清白蛋白毫微球[HSA(ADR)-NS]偶联,制成抗人肝癌免疫毫微球HAb18-HSA(ADR)-NS,使用凝集试验及免疫荧光检测其活性,光镜和电镜下观察其与人肝癌细胞株SMMC-7721特异性结合.MTT法检测该免疫毫微球的体外杀伤性.于人肝癌裸鼠模型上分别使用HAbl8-HSA(ADM)-NS、HSA(ADM)-NS及ADM,检测3者的肿瘤抑制率.结果 HAb18-HSA(ADM)-NS具有单抗活性,能与肝癌细胞特异结合;其体外杀伤SMMC-7721细胞IC50值为44.6μg/ml,与HSA(ADM)-NS(345.5μg/ml)及ADM(365.5μg/ml)相比,明显降低;体内肿瘤抑制率比HSA(ADM)-NS及ADM明显增强(P＜0.001).结论 HAb18-HSA(ADM)-NS具有免疫活性,对肝癌细胞有主动靶向性,体内外均具有比HSA(ADM)-NS及ADM更强的抗癌效果.
