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白血病的DKK1基因研究进展
大量研究证实,Dickkopf-1(DKK1)基因启动子区域甲基化改变与许多肿瘤性疾病的发生发展有关,它是通过与相应受体结合,阻断Wnt/β-catenin/TCF传导通路,抑制肿瘤细胞增殖和侵袭,诱导其凋亡.白血病是一类造血干细胞恶性克隆增殖性疾病,其发病机制被证实与Wnt信号通路的异常激活有密切关系.Wnt信号传导通路与造血干细胞的自我更新和增殖有关,它可调控细胞的生长、分化、迁移及血管发生,其表达受通路抑制基因的调节,如Dickkopf-1(DKK1)基因.白血病常出现DKK1基因甲基化修饰,使得DKK1基因下调或沉默,导致经典Wnt信号通路被激活,引起白血病的发生.针对DKK1基因出现了一些关于白血病治疗的研究,主要是诱导DKK去甲基化.随着对DKK1表达和功能的深入研究,有可能在白血病早期诊断、治疗、预后预警等方面发挥重要的作用.现就上述内容的研究进展作一综述.
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地西他滨对白血病细胞DKK1基因去甲基化的实验研究
目的:探讨地西他滨对急性髓系白血病细胞株HL-60中DKK1的表达及其下游Wnt信号通路的影响.方法:采用流式细胞术(FCM)和DNA Ladder分析检测不同浓度地西他滨对HL-60细胞凋亡的影响,甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)检测DKK1基因甲基化状态,qRT-PCR方法检测mRNA表达水平,Western-blot方法检测蛋白的表达变化.结果:FCM检测结果表明,不同浓度地西他滨作用于HL-60细胞48 h后,地西他滨组的早期凋亡细胞数明显增多(P ＜0.05);DNA梯度检测结果发现,地西他滨组出现明显的细胞凋亡特异性梯度条带;MS-PCR检测发现,DKK1基因发生去甲基化,RT-PCR和Wertern blot检测显示mRNA表达水平增高,DKK1蛋白表达增加,β-catenin及C-MYC蛋白表达降低.结论:地西他滨可以通过DKK1基因去甲基化及抑制Wnt通路的作用,促进HL-60细胞凋亡.
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糖皮质激素对DKK1基因调控骨髓间充质干细胞增殖分化的影响
目的 观察不同浓度糖皮质激素刺激下骨髓间充质干细胞(BMSCs)中DKK1基因表达的变化及其对BMSCs增殖分化能力的影响.方法 分离培养人BMSCs,分为对照组[不含地塞米松(Dex)]、Dex8组(含10-8mol/L Dex)及Dex6组(含10-6mol/L Dex).分别用含0、10-8、10-6mol/L Dex培养液刺激BMSCs,采用Real-time PCR检测DKK1基因的表达量,并通过克隆形成实验检测其对BMSCs增殖能力的影响.分别用含0、10-8、10-6mol/L Dex的成骨诱导液及成脂诱导液刺激BMSCs,于3d后提取RNA,采用Real-time PCR检测DKK1基因、成骨基因(Runx2、OCN)及成脂基因(C/EBP、PPARγ)的表达量,并于3周后通过茜素红染色及油红O染色检测其对成骨、成脂分化能力的影响.结果 与对照组及Dex8组比较,Dex6组DKK1基因的表达高,而对应的克隆形成能力低.成骨诱导环境下,Dex8组Runx2、OCN的表达高,而DKK1的表达低,茜素红染色只有Dex8组出现钙化结节.成脂诱导环境下,Dex6组C/EBP、PPARγ及DKK1的表达高,油红O染色Dex6组出现大量的脂滴.结论 高浓度糖皮质激素刺激下,DKK1表达上调,BMSCs增殖受抑.DKK1对BMSCs的骨向分化具有抑制作用,而对其脂向分化具有促进作用.糖皮质激素导致骨质疏松可能与其调控DKK1的表达、影响BMSCs的增殖和分化有关.
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DKK1基因过表达慢病毒载体构建及其在大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞PC12中的表达
目的 构建DKK1基因过表达慢病毒载体,并探讨其是否能在大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞PC12中高效、稳定表达.方法 PCR法扩增DKK1基因序列,将其转入质粒并整合到载体上,构建GV358-DKK1慢病毒表达载体;将构建成功的目的质粒和辅助包装质粒共转染293T细胞对慢病毒进行包装,荧光显微镜观察基因在293T细胞中的表达,用病毒梯度稀释法测定病毒滴度.将培养好的PC12细胞随机分为三组,空载体阴性对照组、PC12-DKK1组分别用制备的空载体慢病毒及GV358-DKK1颗粒进行感染,空白对照组常规培养.用qRT-PCR和Western blotting法分别检测PC12细胞中DKK1 mRNA与蛋白的相对表达量.结果 限制性内切酶鉴定及测序结果提示GV358-DKK1慢病毒表达载体构建成功,转染293T细胞获得高滴度的病毒.PC12-DKK1组DKK1 mRNA及蛋白相对表达量均较空载体组、空白对照组高(P均＜0.05).结论 DKK1基因过表达慢病毒载体构建成功,且其可在PC12细胞中稳定表达.
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WNT信号通路中抑制基因WIF1与DKK1基因多态性与中国汉族人群结核易感性的相关性研究
目的 初步探究WNT信号通路中关键抑制基因WIF1和DKK1多态性位点与结核易感性、临床特征及实验室指标的相关性. 方法 纳入四川大学华西医院2014年12月—2016年11月期间475例结核病患者和370例健康对照,采用高通量基因分型技术对WNT信号通路中WIF1基因rs58635985位点和DKK1基因rs11001548位点多态性进行分型检测,并收集受试者相关临床资料.应用 χ2检验、logistic回归模型等统计学方法分析单核苷酸多态性位点的等位基因、基因型、遗传模型在两组之间的分布差异,以及其是否影响结核患者临床表征. 结果 WIF1 rs58635985位点和DKK1 rs11001548位点的等位基因(P=0.275、0.949)、基因型(P=0.214、0.659)及遗传模型:加性模型(P=0.214、0.659)、显性模型(P=0.414、0.827)与隐性模型(P=0.227、0.658)的频率分布在结核病组与健康对照组比较中差异无统计学意义.亚组分析显示:rs58635985和rs11001548等位基因和基因型分布差异无统计学意义(肺结核组vs.健康对照组:P＞0.05;肺结核组vs.肺外结核组:P＞0.05).rs58635985位点和rs11001548位点在结核病相关临床特征(发热、盗汗、乏力等)以及实验室指标(血常规、红细胞沉降率、TB-DNA等)分析中差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 未发现WIF1基因rs58635985位点和DKK1基因rs11001548位点与中国西部地区汉族人群结核病遗传易感性、临床特征及实验室指标有关联,后续仍需扩大样本量在不同人群中进行验证分析.
