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急性白血病MLL融合基因新检测方法的建立和应用
本研究旨在建立一种快速检测急性白血病中常见MLL融合基因的方法.针对10种常见的MLL融合基因,首先通过检索文献及数据库,确定已报道的所有融合形式并据此设计引物和探针.其次,以构建的16个阳性质粒和阴性细胞系建立和优化多重实时PCR检测体系.后,利用所收集的54份白血病标本对该体系进行临床评估,并对检出的阳性标本进行测序验证.结果:该体系可对所有阳性质粒进行有效检测,且灵敏度均可达10个拷贝.在54份标本中,检出MLL-AF4、MLL-AF9、MLL-AF10、MLL-ELL4种类型的融合基因,对阳性标本进行测序,测序结果与检测结果一致.结论:本研究建立了一种筛查MLL融合基因的多重实时PCR方法,能够对发生频率约占MLL融合类型90％的10种融合基因进行检测.该体系具有快速、灵敏、特异、可靠的优点,将有助于临床上MLL融合基因阳性患者的诊断和管理.
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混合系白血病全长基因在AML-M4/M5患者中的突变检测
急性髓系白血病(AML) -M4、M5常有11号染色体异常,定位于11q23的混合系白血病(MLL)基因异常所形成的MLL-PTD和MLL融合基因在该病的发病机理中具有重要作用.但在该类白血病绝大多数未能检测出染色体水平异常,是否存在MLL基因的其他突变?本研究对MLL全长基因的外显子进行了测序分析.选取25例初发核型正常的AML M4、M5患者(排除MLL融合基因和MLL-PTD及M4eo),进行了MLL全长基因的外显子PCR扩增直接测序分析,对发现的突变在基因组DNA水平进行验证.利用Mass Array方法在正常对照样本和AML扩大样本中对发现的点突变进行检测.结果发现,在MLL的RD、PHD、TAD和SET功能域中存在着高频的缺失、插入及多个点突变；同时对照研究正常样本,发现也存在上述的变异,且突变频率无统计学差别(P＞0.05).结论:检测到的MLL基因发生在mRNA水平的缺失、插入和多个点突变,分别是MLL在转录水平的选择性剪接和MLL的单核苷酸多态性,它们共同构成了MLL的遗传多态性；这些MLL基因遗传多态性可能与AML M4、M5的发病不直接相关,对于治疗、预后及其他生物学表型的意义还有待进一步探讨.
