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HSP90抑制剂17-DMAG对白血病细胞株K562增殖及凋亡的影响
目的:通过HSP90抑制剂17-二甲基胺乙基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-DMAG)作用于白血病K562细胞株,观察HSP90在白血病K562细胞增殖与凋亡中的作用.方法:收集K562细胞,应用HSP90抑制剂17-DMAG作用于K562细胞株,通过半定量PCR检测HSP90的基因表达,WST技术检测17-DMAG对细胞增殖的影响,An-nexin V流式细胞术检测细胞凋亡.结果:17-DMAG处理K562细胞不同时间后,K562细胞的生长明显受抑,且呈时间依赖性(48 h)(r=0.9918)和剂量依赖性(3.2 μmoL/L)(r=0.9999) (P ≤0.01);不同浓度17-DMAG处理K562细胞不同时间后,K562细胞明显凋亡,且呈剂量依赖性(r=0.9903)(P≤0.01);不同浓度17-DMAG作用于K562细胞48 h后,HSP90 mRNA表达明显减少,17-DMAG下调HSP90 mRNA的表达,且呈剂量依赖性(r=0.9227)(P≤0.01).结论:HSP90抑制剂17-DMAG能够抑制白血病K562细胞的增殖,诱导K562细胞凋亡,这为17-DMAG用于白血病的治疗提供实验依据.
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HSP90抑制剂17-DMAG影响结肠癌SW620细胞生长的实验研究
目的 研究热休克蛋白90(HSP90)新型抑制剂17-DMAG对结肠癌细胞株SW620增殖及凋亡的影响,并对其机制作初步探讨.方法 以不同浓度的17-DMAG作用于对数生长期的结肠癌SW620细胞,显微镜下观察细胞凋亡形态学变化;应用CCK8法检测其吸光度值,并计算细胞生长抑制率;以Annexin V-FITC和PI双染法检测各组细胞凋亡率的变化;采用流式细胞仪分析各组细胞的细胞周期变化.结果 光学显微镜观察到17-DMAG药物处理组的细胞出现细胞凋亡现象.CCK8法显示17-DMAG对结肠癌SW620细胞株的生长增殖有抑制作用,并呈时间-剂量依赖性(P<0.05).Annexin-FITC/PI双染色法检测结果 显示17-DMAG浓度为1.0 μmol/L、2.5 μmol/L、5.0 μmol/L的细胞凋亡率分别为30.03%、50.50%和77.23%,与对照组相比有统计学差异(P<0.05).流式细胞仪细胞周期分析显示,经17-DMAG药物处理过的不同浓度的药物组与对照组比较,G0/G1期细胞比例显著上升,S期细胞比例下降,G2/M期细胞比例显著上升,有统计学差异(P<0.05);但各浓度17-DMAG药物组间比较,G0/G1期、S期、G2/M期细胞比例无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05).结论 HSP90抑制剂17-DMAG对结肠癌细胞SW620的生长增殖有明显的抑制作用,呈时间和剂量依赖性,并诱导其凋亡;同时,17-DMAG影响SW620细胞的周期,但这种影响与17-DMAG的浓度无关.
关键词： 结肠肿瘤 HSP90热休克蛋白质类 细胞增殖 细胞凋亡 17-DMAG -
17-DMAG对人LX2肝星状细胞增殖及凋亡作用的研究
目的：研究HSP90抑制剂17-DMAG在体外对人LX2肝星状细胞生长增殖及细胞凋亡的作用。方法体外培养人LX2肝星状细胞，用细胞毒试验法（MTT）观察不同浓度和作用时间的17-DMAG对LX2细胞的生长抑制作用；流式细胞仪检测药物作用后LX2细胞凋亡的发生；Western blot检测α-SMA的表达，并与对照组进行对比。结果17-DMAG能抑制人LX2肝星状细胞生长，且呈浓度和时间依赖性（P＜0.01），随药物浓度加大和作用时间延长，存活细胞数量逐渐减少；流式细胞仪证实17-DMAG可诱导LX2细胞凋亡，与对照组比较，实验组细胞凋亡率明显增加（P＜0.01）；Western blot可以证实17-DMAG可使LX2细胞α-SMA表达减少，与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论17-DMAG可呈浓度和时间依赖性的抑制人LX2肝星状细胞的生长，其机制为诱导细胞凋亡，并且通过这种机制来减少α-SMA的表达来抑制胶原的产生。
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HSP90抑制剂17-DMAG对胃癌细胞株SGC-7901增殖及凋亡的影响
目的:探讨热休克蛋白90(HSP90)功能特异性抑制剂17-DMAG对胃癌细胞SGC-7901增殖及凋亡的影响.方法:体外培养人胃癌细胞SGC-7901,以不同浓度的17-DMAG处理后采用MTT法检测SGC-7901细胞的生长抑制情况,流式细胞仪碘化丙啶(PI)染色分析细胞周期分布,流式细胞仪及Annexin V-FITC试剂盒监测17-DMAG对胃癌细胞SGC-7901凋亡的影响.结果:不同浓度的17-DMAG对人胃癌细胞SGC-7901有明显的生长抑制作用,各组之间比较(P＜0.01),且呈时效量效依赖关系(F=241.313,246.856,均P＜0.001).17-DMAG作用24 h后胃癌细胞株SGC-7901呈现G2/M期阻滞,试验组与对照组比较(F=231.991,P＜0.001),呈浓度依赖关系.17-DMAG处理胃癌细胞SGC-7901 24 h早期凋亡细胞增加,48 h晚期凋亡细胞增加.结论:17-DMAG可明显抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖,使胃癌细胞SGC-7901阻滞于G2/M期,诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡.
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17-DMAG 对缺氧肿瘤细胞的辐射敏感性影响
目的 研究17-DMAG对缺氧模拟剂氯化钴(CoCl2)诱导的人宫颈癌HeLa细胞的辐射敏感性影响.方法 首先应用不同浓度的CoCl2处理HeLa细胞24h,采用Western blot技术检测HIF-1α蛋白表达量,然后选取浓度为200μ mol/L的CoCl2对Hela细胞进行模拟缺氧处理24 h,应用不同浓度的17-DMAG预处理细胞16h后,接受2、4、6、8Gy不同剂量的射线照射,采用克隆形成实验观察细胞的存活率,应用 Western blot技术检测 HIF-1α蛋白表达.结果 在 CoCl2浓度为200μmol/L时HIF-1a蛋白表达量强;不同浓度17-DMAG处理组的HeLa细胞在不同照射剂量组间的存活率差异均有高度统计学论(均P＜0.01);17-DMAG预处理缺氧HeLa细胞后,HIF-1a蛋白表达随药物浓度增加受到显著抑制.结论 17-DMAG 预处理可增加缺氧细胞辐射敏感性,其机制可能是通过抑制HIF1a 蛋白表达而发挥作用.
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17-DMAG对鼻咽癌细胞株HNE1增殖与凋亡的影响
目的:探讨17-DMAG对鼻咽癌HNE1细胞增殖与凋亡的影响.方法:MTT比色法测定17-DMAG对HNE1细胞活性的影响;溴化丙啶(PI)染色法测定HNE1细胞凋亡;JC-1染色法测定17-DMAG对线粒体膜电位的影响;Western blot测定细胞Bcl-2/Bax的表达水平.结果:17-DMAG可抑制鼻咽癌HNE1细胞的增殖,且该抑制作用随作用时间的延长和剂量增加而增强;PI染色显示17-DMAG具有诱导HNE1细胞凋亡作用(P＜0.01);JC-1染色显示17-DMAG可诱导HNE1细胞线粒体膜电位降低;Western blot显示17-DMAG作用HNE1细胞24 h,Bcl-2表达显著降低(P＜0.01),Bax表达明显增加,尤其在中、高剂量组(P＜0.01).结论:17-DMAG具有抑制鼻咽癌细胞HNE1细胞增殖的作用,该抑制作用与浓度和时间成正相关.该作用主要通过诱导HNE1细胞凋亡实现,诱导凋亡的机制可能与其下调细胞线粒体膜电位,降低Bcl-2表达,增加Bax水平有关.
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17-DMAG对肝癌HepG2细胞的作用研究
目的 研究HSP90新型抑制剂17-二甲胺乙胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-dimethylaminoethylamino- 17 - demethoxygeldanamycin,17-DMAG)对肝癌细胞株HepG2增殖及调亡的影响,并对其机制进行初步探讨.方法 MTT比色法检测不同浓度的17-DMAG及5mg/L的DDP对HepG2细胞的生长抑制率；Annexin V-FITC/PI双染法检测经17-DMAG及DDP作用后HepG2细胞凋亡率的变化.结果 MTT法显示17-DMAG能抑制肝癌HepG2细胞的增殖,且呈时间-剂量依赖性.250 nmol/L的17 - DMAG低浓度水平较DDP组对HepG2细胞的抑制率明显增高(P＜0.05).光学显微镜观察17-DMAG作用48 h后HepG 2细胞密度减低,细胞体积变小,随着药物浓度增大,细胞数目明显减少.Annexin-FITC/Pl双染法检测结果显示,400 nmol/L 17-DMAG干预48 h后细胞早期凋亡率为(22.42±1.83)％,5mg/L顺铂干预48 h后细胞早期凋亡率为(6.50±1.20)％,未干预组48 h后细胞早期凋亡率为(0.58±0.49)％,表明17-DMAG能诱导HepG2细胞凋亡,且17-DMAG组凋亡率明显高于5mg/L顺铂组及未干预组(P＜0.05).结论 热休克蛋白90抑制剂17-DMAG呈时间-剂量依赖性抑制肝癌HepG2细胞增殖,随着药物浓度的加大,作用时间的延长,细胞增殖能力逐渐下降,并且能诱导HepG2肝癌细胞的凋亡.17-DMAG抑制肝癌细胞的作用较DDP强.
关键词： 肝癌细胞 热休克蛋白90抑制剂 17-DMAG 顺铂 -
mTOR信号通路在17-DMAG克服EML4-ALK阳性肺癌细胞株H3122对alectinib耐药中的作用机制研究
目的 观察mTOR信号通路在17-DMAG克服旁路信号通路激活诱导棘皮动物微管相关蛋白样4与间变性淋巴瘤激酶(echinoderm microtubule-associated protein like 4-anaplastic lymphoma kinase,EML4-ALK)融合基因阳性肺癌细胞株H3122(以下简称“H3122细胞”)对alectinib耐药中的变化,并探讨其内在的调控机制.方法 加入100 ng/mL转化生长因子α(transforming growth factor-α,TGF-α)和100 ng/mL表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)诱导H3122细胞对alectinib耐药,观察加入17-DMAG后上述耐药能否被克服.采用CCK-8法检测不同处理方式下H3122细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质免疫印迹(Western blot)技术检测不同处理方式下细胞中ALK、EGFR及其磷酸化蛋白的表达,观察其下游mTOR信号通路关键蛋白及活化水平的表达情况.结果 alectinib作用72 h后H3122细胞增殖率随药物浓度升高而下降,IC50为0.042 μmol/L;联合TGF-α或EGF后H3122细胞对alectinib耐药,IC50远大于10μmol/L;单药17-DMAG处理后H3122细胞增殖率随药物浓度升高而下降,IC50为0.245 μmol/L;联合TGF-α或EGF后H3122细胞增殖率亦被17-DMAG抑制,且呈剂量依赖性,IC50分别为0.251 μmol/L和0.301 μmol/L.经0.05 μmol/L alectinib作用72 h后H3122细胞凋亡率为(30.01±0.92)％,alectinib联合TGF-α或EGF后细胞凋亡率分别为(6.36±0.14)％和(6.13±0.21)％,显著低于alectinib单药处理(P＜0.001);经0.3 μmol/L 17-DMAG单药或联合TGF-α、EGF作用72 h后H3122细胞凋亡率分别为(28.37±1.75)％、(26.69±1.2)％和(26.62±0.72)％,差异无统计学意义(P＞0.05).alectinib可抑制H3122细胞中p-ALK、p-mTOR的表达,也可抑制mTOR上、下游关键蛋白的活化状态;EGF可明显增加细胞中p-EGFR、p-mTOR及mTOR上、下游关键蛋白的活化水平表达;alectinib可抑制p-ALK表达,但联合EGF后不能抑制mTOR及mTOR上、下游关键蛋白活化水平的表达;即使联合EGF后,17-DMAG亦能抑制H3122细胞中ALK、EGFR、mTOR信号通路蛋白及其活化状态蛋白的表达.结论 旁路信号通路激活介导EML4-ALK融合基因阳性肺癌细胞株H3122对alectinib耐药的方式具有可行性,mTOR信号通路在17-DMAG克服旁路信号通路激活引起alectinib的获得性耐药过程中有一定作用.
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HSP90抑制剂17-DMAG调控胰腺癌细胞PANC-1增殖及凋亡的初步研究
目的 探讨热休克蛋白90(HSP90)功能特异性抑制剂17-DMAG对胰腺癌细胞PANC-1增殖与凋亡的影响.方法 体外培养腺癌细胞PANC-1,17-DMAG处理PANC-1细胞后,CCK8法测定细胞生长曲线,观察细胞增殖的抑制情况,流式细胞仪测定细胞凋亡率的变化,Jc-1染色检测线粒体膜电位变化,RT-PCR法测定17-DMAG处理PANC-1细胞前后Bcl-2、Bax表达变化.结果 17-DMAG处理组24 h时D(490)值较对照组差异无统计学意义(P＞0.05),48、72 h后较对照组D(490)值分别减少(18.3±2.4)％、(21.5±3.2)％,差异有统计学意义(P＜0.05).17-DMAG处理组48 h时较对照组能显著地抑制PANC-1细胞增殖(P＜0.05),细胞凋亡率[(22.4±2.4)％]较对照组[(4.2±1.7)％]显著增加(P＜0.05)；线粒体电位显著降低(P＜0.05).RT-PCR结果显示,17-DMAG处理组抑制Bcl-2的表达,促进Bax的表达.结论 17-DMAG可抑制胰腺癌细胞PANC-1增殖并诱导其凋亡,该效应可能是通过调控凋亡相关蛋白Bcl-2家族成员的表达实现.
