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JQ1诱导SUP-B15细胞凋亡的Notch1通路机制研究
目的:本研究观察布罗莫结构域抑制剂JQ1诱导人Ph阳性急性淋巴细胞白血病细胞株(SUP-B15)凋亡的Notch1通路可能机制.方法:用不同浓度JQ1在不同时期处理SUP-B15细胞,用四甲基偶氮唑蓝试验(MTT法)检测细胞增殖情况;用流式细胞术检测细胞周期;实时定量PCR法检测MIS2、Notch1、Hes1、BCR-ABL mRNA的表达水平.结果:JQ1在0-4 μmol/L的浓度范围内能抑制SUP-B15细胞的生长,并呈现剂量-时间依赖性;JQ1在1、2、4 μmol/L处理SUP-B15细胞48 h后,诱导细胞S期阻滞,并呈剂量依赖性,与同时间对照组比较有统计学差异(P＜0.05);与同时间对照组相比,JQ1能够降低MIS2、Notch1、Hes1、BCR-ABL mRNA的表达.结论:JQ1可以有效抑制SUP-B15细胞生长增殖,而Notch1通路凋亡途径很可能是JQ1促进Ph+ ALL细胞凋亡的多途径之一.
关键词： JQ1 SUP-B15细胞株 Notch1通路 -
姜黄素下调结直肠癌细胞Notch1信号通路研究
目的 检测Notch1信号通路中Notch intracellular domain蛋白(NICD1蛋白)在大肠腺癌组织中表达的情况;探讨姜黄素对人结肠癌细胞SW480及HT29细胞中Notch1信号通路的影响.方法 二步法免疫组化检测40例结直肠癌、31例癌旁肠组织石蜡切片中Notch1 intracellular domain蛋白(NICD1)的表达情况,通过对比人结肠直肠癌与癌旁正常肠黏膜细胞中蛋白阳性表达率判断NICD1蛋白与人结直肠癌的关系;不同浓度姜黄素(0、7.5、15、30、60 μmol/L)分别处理结肠腺癌细胞SW480和HT29细胞24 h和48 h后,Western blot法检测细胞内NICD1、Notch1及HES-1蛋白的表达情况.结果 NICD1在人结直肠癌组织中均表达,阳性率100％,癌旁肠组织中部分表达,阳性率为90.3％,但癌组织表达强度明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P＜0.05);Western blot结果示姜黄素能下调人结肠腺癌细胞SW480及HT29细胞中NICD1、Notch1及HES-1蛋白的表达,有时间和剂量依赖.结论 Notch1信号通路中NICD1蛋白在结直肠癌组织中的过度表达可能与肿瘤的发生发展相关,其阳性表达的部位可能与癌组织的病理分期有关;姜黄素可能通过调控Notch1信号通路抑制结直肠癌细胞增殖.
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Notch1通路对胶质瘤起始细胞侵袭迁移能力的影响及其机制研究
目的 研究Notch1通路对胶质瘤起始细胞(GICs)侵袭迁移能力的影响及调控机制.方法 (1)采用箱形图分析Bredel Brain、Sun Brain数据库中正常脑组织和胶质母细胞瘤组织Notch1mRNA的表达,采用Kaplan-Meier生存分析肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库中胶质瘤患者的预后与Hes1表达的关系,采用热图分析GEO数据库中GICs、传统普通细胞系Notch1、CXCR4的表达.(2)采用免疫磁珠分选法建立U87 GICs和U251GICs系,免疫荧光染色检测细胞CXCR4、Notch1的表达.将U87 GICs和U251 GICs分为二甲基亚砜(DMSO)组、阴性对照无义序列(shNC)组、MK0752组、Notch1干扰序列(shNotch1)组,shNotch1组、shNC组细胞分别转染含shNotch1的重组慢病毒和对照序列,MK0752组、DMSO组细胞分别加入80 nmol/mL MK-0752和等量DMSO,Western blotting实验检测4组细胞Notch1、CXCR4、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)蛋白的表达.Transwell侵袭和迁移实验检测shNotch1组、shNC组细胞的侵袭和迁移能力. 结果 (1)箱形图显示胶质母细胞瘤组织Notch1 mRNA的表达高于正常脑组织,差异有统计学意义(P＜0.05).生存分析显示高表达Hes1的胶质瘤患者生存率明显短于低表达Hes1的胶质瘤患者,差异有统计学意义(P＜0.05).热图显示Notch1和CXCR4在GICs中表达高于传统普通细胞系.(2)免疫荧光染色检测显示Notch1和CXCR4在U87 GICs和U251 GICs中呈高表达并存在共定位关系.Western blotting检测显示MK0752组、shNotch1组U87 GICs和U251 GICs中Notch1、CXCR4、p-mTOR蛋白的表达低于DMSO组和shNC组.Transwell实验显示shNotch1组穿膜的平均每个视野细胞数低于shNC组,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 Notch1通路可以通过调控CXCR4的表达,促进GICs的侵袭迁移能力.
