首页 > 文献资料
-
Embelin逆转K562/D细胞对柔红霉素耐药与P-gp及MDR1mRNA无关
目的:探讨XIAP抑制剂Embelin逆转K562/D细胞对柔红霉素(daunorubicin,DNR)耐药的机制以及与P-gp及MDR1 mRNA的关系.方法:应用MTT法检测不同浓度DNR及联合Embelin对K562及K562/D细胞增殖抑制情况的影响;应用Annexin V-FITC/PI复染流式细胞术检测细胞凋亡的改变;用Western blot方法检测XIAP、Caspase-3、P-gp、BCL-2及BAX的蛋白表达情况;用RT-PCR检测XIAP、MDR1、BCL-2及BAX的mRNA表达情况.结果:DNR作用于K562与K562/D细胞系24 h的IC50值分别为2.177 μg/ml和69.43μg/ml,耐药指数为31.89;分别用浓度为3、10、30、100及300 μg/ml的Embelin作用于K562/D细胞系24 h,其增殖抑制率分别为2.70％±1.08％、10.92％±4.89％、28.13％±2.09％、36.56％±3.24％及43.59％±1.16％;用0.1、1、10及100μg/ml DNR联合10 μg/ml Embelin作用于K562/D细胞系24 h,细胞增殖抑制率分别为31.92％±3.29％、49.57％±6.87％、55.16％±0.78％和71.94％±3.89％,其IC50值为2.11 μg/ml,逆转指数为32.91.用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测凋亡率.单独应用0.1 μg/ml DNR作用于K562/D细胞系24 h的细胞凋亡率为12.06％±0.95％,而联合10和30 μg/ml Embelin作用于K562/D细胞系24h的细胞凋亡率分别为27.54％±0.59％和39.59％±1.57％;Western Blot结果显示,DNR联合Embelin后,Caspase-3的表达明显下降(P＜0.05),且用抑制剂Z-VAD-FMK可以抵消药物联合应用对细胞的增殖抑制作用.同时,XIAP和BCL-2蛋白表达明显下降(P＜0.05),BAX蛋白表达明显升高(P＜0.05),而P-gp的表达无改变;RT-PCR结果显示,DNR联合Embelin后,XIAP和BCL-2 mRNA表达明显下调(P＜0.05),BAX mRNA表达明显上调(P＜0.05),MDR1 mRNA表达无明显变化(P＞0.05).结论:降低XIAP表达有助于增强DNR对K562/D细胞的作用;Embelin逆转K562/D细胞对DNR耐药机制与P-gp及MDR1 mRNA无关.
