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Tim-3、PD-1和CD28表达与慢性乙肝患者肝脏iNKT细胞功能的关系
目的 研究慢性乙肝患者肝脏中恒定自然杀伤T (invariant nature killer T,iNKT)细胞的功能与其表面Tim-3、PD-1、CD28表达的关系.方法 无菌分离人体肝脏单个核细胞,建立α-半乳糖神经酰胺(α-GalCer)诱导慢性HBV感染后的iNKT细胞体外诱导扩增模型,以流式细胞术检测体外培养基线水平0h和72 h的iNKT细胞的表面Tim-3、PD-1、CD28的表达以及IL-4、IFN-γ的分泌情况;用ELISA法检测培养上清中IL-4、IFN-γγ的水平;阻断PD-1、Tim-3及活化CD28信号通路,以流式和ELISA法检测IL-4+iNKT与IFN-γ+ iNKT.结果 慢性乙肝患者(实验组)肝脏中的iNKT细胞的比例明显低于正常人(对照组)(P＜0.05);iNKT表面Tim-3、PD-1的表达明显增多(P＜0.05),而CD28的表达则明显减少(P＜ 0.05);iNKT细胞分泌IL-4、IFN-γγ的功能明显降低(P＜0.05);单一α-GalCer刺激培养72 h后,实验组IL-4+iNKT、IFNγ+ iNKT的表达没有明显变化(P＞0.05),而阻断PD/PD-L1、Tim-3/Tim-3L和(或)活化CD28/CD80信号通路后,IL-4+iNKT、IFN-γ+ iNKT细胞的表达明显提高(P＜0.05).结论 慢性乙肝患者肝脏iNKT细胞功能存在明显的缺陷,并提示负向调控因子Tim-3、PD-1表达的增加和正向调控因子CD28表达的降低可能与iNKT细胞功能的下调密切相关.
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慢性乙型肝炎患者iNKT细胞PD-1表达的变化
目的 检测慢性乙型病毒性肝炎患者外周血中iNKT细胞比例、细胞因子分泌能力以及其表面程序性死亡因子1(programmed death 1,PD-1)的表达情况.方法 采集慢性乙型肝炎患者外周血,利用CD3、TCR Vα24、TCR Vβ11、CD279单克隆抗体标记后经流式细胞术直接检测iNKT细胞比例及其PD-1表达比例;采用PMA+Ionomycin体外活化iNKT细胞后流式细胞术检测其胞内IFN-γ分泌情况.结果 慢性乙型肝炎患者外周血iNKT细胞比例[(0.09±0.04)%]与健康对照者[(0.11±0.07)%]相比无明显差异,但体外活化后胞内IFN-γ分泌量减少[(24.64±7.71)%vs(42.35±11.60)%],且iNKT细胞PD-1表达升高[(36.7±9.7)%vs(16.2±5.4%].结论 慢性乙型肝炎患者外周血iNKT细胞功能的下降可能与其表面负性刺激分子PD-1表达上调密切相关.
关键词： 慢性乙型肝炎 iNKT细胞 程序性死亡因子1(PD-1) IFN-γ -
含噻唑烷-4-酮的免疫刺激剂CH2a增强人iNKT细胞的功能
目的 研究含噻唑烷-4-酮的糖类衍生小分子免疫刺激剂CH2a对人iNKT细胞功能的影响.方法 分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),经α-半乳糖神经酰胺(a-Galcer)和IL-2体外扩增后,利用磁珠分选分离纯化得到恒定型自然杀伤T细胞(iNKT细胞).5(6)-羧基二乙酸荧光黄琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)标记的纯化iNKT细胞,与CH2a共孵育后,流式细胞术检测细胞增殖和分代,IFN-γ和IL-4的表达；MTT法定量检测细胞增殖率及对K562细胞的杀伤活性.ELISA检测CH2a处理细胞培养基中IFN-γ和IL-4水平.结果 CH2a能显著促进IL-2引起的iNKT细胞体外增殖；提高IFN-γ和IL-4的生成量及IFN-γ/IL-4的比值；并显著增强iNKT细胞的杀伤活性.结论 CH2a有可能通过诱导iNKT分泌Thl类的细胞因子,调节T细胞向Th1分化,从而增强细胞免疫功能；同时显著提高iNKT的细胞毒功能.
关键词： iNKT细胞 磁珠分选 IFN-γ/IL-4 免疫刺激剂 -
iNKT细胞多样性调节机制及其在疾病中的作用
iNKT细胞(invariant nature killer T,iNKT)是T淋巴细胞中独特的亚群.它们表达恒定的TCRVα14与NK细胞的部分标识CD161(NKI.1)分子和NK细胞受体NKR-P1C.iNKT细胞也被认为是经典的NKT细胞.iNKT细胞受体的恒定部分是TCRVα14链.
