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MicroRNA生物合成通路中Gemin3基因单核苷酸多态性与非霍奇金淋巴瘤风险及预后相关性
目的:评估miRNA生物合成过程中Gemin3基因位点rs197412的单核苷酸多态性与患非霍奇金淋巴瘤(NHL)风险及预后的相关性.方法:在230名NHL患者组和120名健康对照者组中采用聚合酶链反应一连接酶检测反应进行MiR-SNP基因分型.利用Kaplan-Meier法计算患者生存曲线,曲线之间的比较采用对数秩检验.多因素生存分析采用Cox比例风险模型进行.结果:rs197412基因分型在NHL组及对照组中分布无差异.患者携带rs197412TT基因型比患者携带CC+ CT基因型生存时间长(P =0.007).此外,该rs197412 SNP也被确定为NHL预后的独立预测因子(相对危险度:2.138;95％可信区间:1.303-3.508;P=0.003).结论:miRNA生物合成通路中Gemin 3基因位点rs197412的单核苷酸多态性与患NHL风险无关,但可能影响NHL的生存.
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Gemin3基因通过抑制p53表达阻碍细胞凋亡
目的 探讨Gemin3基因表达在细胞凋亡中的作用及途径.方法 采用免疫共沉淀、谷胱甘肽-S转移酶共沉淀实验确定Gemin3与p53两种蛋白在体内、体外相互结合及相瓦作用的结构域.荧光素酶报告基因检测转染Gemin3基因对p53基因的影响,依靠慢病毒载体介导小干扰RNA敲低Gemin3基因的表达,并经嘌呤霉素筛选获得稳定的Gemin3低表达细胞系,实时定量PCR检测Gemin3敲低对p53及其下游基因在转录水平的影响,流式细胞术检测Gemin3敲低对细胞凋亡的影响.结果 Gemin3的C端与p53的中部DNA部位相互结合.将p53报告基因、p53蛋白基因以及逐渐增量的Gemin3基因共转染Saos-2细胞,随着Gemin3质粒转染浓度的增高,p53介导的报告基因表达水平逐渐降低,Gemin3在转录水平抑制p53基因的表达.实时定量PCR结果显示,与对照细胞比较,Gemin3敲低细胞中,p53、p21和Bax mRNA的表达水平明显增高.Western blot检测结果显示,Gemin3敲低细胞中,p53的表达明显升高.流式细胞术检测结果显示,敲低Gemin3基因的表达导致细胞凋亡的增加.结论 Gemin3与p53相互结合并通过抑制p53的表达阻碍细胞凋亡.
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EB病毒核抗原3C提高Gemin3基因的表达
目的 探讨EB病毒核抗原(EBNA )3C对Gemin3基因表达的影响.方法 共转染EBNA3C和Gemin3基因至HEK293细胞.依靠慢病毒载体介导发卡RNA干涉敲减EBNA3C基因的表达,并经嘌呤霉素筛选获得稳定的EBNA3C低表达细胞系,采用Western blot检测EBNA3C对Gemin3蛋白表达的影响.结果 Gemin3基因的表达随着EBNA3C表达量的增加而增加,呈剂量依赖性,在EBNA3C基因敲减细胞中Gemin3的表达减少.结论 EBNA3C可提高Gemin3基因表达水平.
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MicroRNA生物合成相关基因在肝癌中的表达及其意义
目的 通过检测肝癌和癌旁组织中microRNA(miRNA)合成相关基因的mRNA表达,分析其与肝癌恶性行为的关系.方法 运用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测肝癌组织及其配对癌旁组织中miRNA生物合成相关基因的mRNA表达水平,比较分析其表达水平差异及其与肝癌预后的关系.结果 RT-PCR结果显示,与相应的癌旁组织相比,肝癌组织中细胞核内miRNA生物合成相关基因Drosha、DGCR8、DBR1、ADAR、Exportin 5的mRNA表达水平显著升高(P＜0.0001),而细胞质内miRNA生物合成相关基因Dicer、AGO2、GEMIN3、GEMIN4的mRNA表达水平显著下降(P＜0.0001).肝癌组织中DBR1和Exportin 5 mRNA高表达患者的总生存率高于低表达患者(P＜0.05),癌旁组织中DGCR8mRNA高表达患者的总生存率高于低表达患者(P＜0.05).结论 Dicer的表达可能在肝癌发生发展过程中起重要作用.DBR1、Exportin 5和DGCR8可以作为肝癌治疗的潜在干预靶点.
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Gemin3抑制p53介导的细胞凋亡
目的 探讨Gemin3基因表达在细胞增殖中的作用及其途径.方法 采用免疫共沉淀、谷胱苷肽-S转移酶共沉淀实验确定Gemin3与p53两种蛋白在体内、体外相互结合及相互作用的结构域.荧光素酶报告基因检测转染Gemin3基因对p53基因的影响,依靠慢病毒载体介导发卡RNA干涉敲减Gemin3基因的表达并经嘌呤霉素筛选获得稳定的Gemin3低表达细胞系,实时PCR检测Gemin3敲减对p53及其下游基因在转录水平的影响,流式细胞检测Gemin3敲减对细胞增殖的影响.结果 Gemin3的C端与p53的中部DNA结合部位相互结合,Gemin3在转录水平抑制p53基因的表达,敲减Gemin3基因的表达导致细胞凋亡的增加. 结论 Gemin3与p53相互结合并通过抑制p53的表达促进细胞的增殖.
