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shRNA沉默NSD2基因表达对OCI-Ly3细胞增殖、凋亡及Akt/mTOR信号通路的影响
目的:探讨干扰shRNA下调NSD2基因表达对弥漫大B细胞淋巴瘤OCI-Ly3细胞增殖、凋亡及Akt/mTOR信号通路的影响.方法:NSD2 shRNA慢病毒转染OCI-Ly3细胞,应用real time Q-PCR检测NSD2mRNA的表达和Western blot法检测NSD2蛋白的表达,以鉴定NSD2 shRNA的沉默效果,应用CCK-8试验检测细胞增殖,AnnexinV/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot测定组蛋白H3K36二甲基化水平(H3 K36me2)、BAX BCL-2、caspase-3、Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、磷酸化mTOR (p-mTOR)、磷酸化P70核糖体蛋白S6激酶(phos-phorylation P70 ribosomal protein S6 kinase,p-P70S6K)的变化.结果:NSD2 shRNA慢病毒转染OCI-Ly3细胞72 h后,real time Q-PCR和Western blot检测显示NSD2的mRNA和蛋白表达均有明显下降(P＜0.05),NSD2 shRNA组细胞增殖率明显低于对照和Neg shRNA组(P＜0.05),NSD2 shRNA组细胞的凋亡率明显高于对照组和和NegshRNA组(30.37±4.22)％vs(1.36±0.52)％和(2.17±1.43)％(P ＜0.05);促凋亡蛋白BAX表达上调,抑制凋亡蛋白BCL-2表达下调,caspase-3表达上调;H3 K36me2水平较对照组明显下降,而检测Akt/mTOR通路蛋白发现,Akt总蛋白水平未明显下降,但是活性形式的磷酸化p-Akt、p-mTOR和p-P70S6K表达下调.结论:干扰沉默NSD2基因可抑制弥漫大B细胞淋巴瘤OCI-Ly3细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能是调节组蛋白H3 K36 me2水平变化,特异性地抑制Akt/mTOR信号通路的活性.
