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同源重组细胞基因敲除与siRNA基因沉默的效果比较
本研究比较细胞系同源重组基因敲除(gene knockout)与siRNA基因沉默(gene silence)二种技术方法用于研究蛋白功能方面的效果差异.对鸡B淋巴细胞瘤来源的DT40细胞系,应用基因打靶技术分离出Sam68基因缺失的细胞株,并且利用稳定表达siRNA的质粒pSilencer-Sam68得到Sam68基因沉默的细胞株.与野生型细胞株相比,对这些细胞株进行Sam68的功能解析.结果表明:Sam68基因缺失细胞表现出明显的生长速度迟缓,通过细胞周期检测揭示这些细胞生长速度延迟是由于细胞周期中的G2/M期延长;但在Sam68基因沉默细胞中却没有看到这些变化.结论:针对活细胞中的蛋白功能研究,应用细胞系基因敲除技术比siRNA基因沉默技术能够得到更加清晰的实验结果.
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Sam68及其在肿瘤形成中的作用
Sam68是一种细胞内信号转导及RNA激活蛋白,通过自身的多个功能性模体与RNA,Src激酶家族及其他多种细胞内信号分子相作用.它作为细胞信号转导过程中的衔接蛋白参与细胞周期的调控,与细胞增殖和凋亡密切相关.其表达异常可导致细胞的恶性转化.
关键词： Sam68 KH结构域 Src蛋白酪氨酸激酶 细胞增殖和凋亡 -
Sam68对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响
目的：探讨Sam68在结直肠癌发生发展中的作用。方法建立Sam68稳定过表达和稳定干扰的结直肠癌细胞株，通过克隆形成实验、MTT法和Transwell侵袭实验检测Sam68对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。结果成功建立Sam68稳定过表达和稳定干扰细胞株；过表达Sam68的结直肠癌细胞株SW480和Ls174t增殖、侵袭和迁移能力明显增强（P<0.05）；干扰Sam68的结直肠癌细胞株SW620和HCT116增殖、侵袭和迁移能力明显下降（P<0.05）。结论 Sam68促进结直肠癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力，在结直肠癌发生发展过程中起重要作用。
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沉默Sam68对鼻咽癌5-8F细胞增殖的影响及其机制
目的 探讨Sam68基因对鼻咽癌5-8F细胞增殖能力的影响及可能的分子机制.方法 通过靶向沉默鼻咽癌5-8F细胞内源性Sam68基因,研究细胞增殖能力的变化情况,并采用qRT-PCR和Western blotting实验方法检测Sam68、细胞周期相关蛋白及其上游分子的表达情况.结果 转染Sam68靶向siRNA的5-8F细胞中,Sam68蛋白和mRNA表达水平均明显降低.MTT、细胞周期实验证实干扰Sam68后5-8F细胞的增殖能力受到抑制；Westem blotting检测结果显示细胞周期相关蛋白Cyclin DI表达明显下调,p27表达上调,同时p-FOX03a、p-Akt和p-GSK-3p的表达明显下调,而总FOX03a、Akt和GSK-3β的表达则无明显变化.结论 Sam68可能通过激活Akt/FOX03a信号通路对细胞增殖的相关分子进行调控,进而影响鼻咽癌细胞的增殖能力.
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Nkx2-5和Sam68在子痫前期胎盘组织中的表达及意义
目的 探讨Nkx2-5和Sam68在子痫前期胎盘组织中的表达及其与围产结局的关系.方法 选取临床确诊的子痫前期孕产妇236例为疾病组,并以择期行剖宫产的正常妊娠晚期孕产妇30例为对照组.在两组新生儿娩出15 min内在母体面取胎盘组织进行Nkx2-5、Sam68和可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)表达水平的检测,统计两组围产儿死亡率,并分析疾病组胎盘组织Nkx2-5和Sam68表达与胎盘组织sFlt-1表达水平和围产结局的关系.结果 疾病组患者围产儿死亡率为6.36％(15/236),高于对照组的0(0/30)(P<0.05).疾病组胎盘组织Nkx2-5、Sam68和sFlt-1 mRNA相对表达量亦均高于对照组(P<0.05).与疾病组围产儿存活者比较,其围产儿死亡者的胎盘组织Nkx2-5、Sam68和sFlt-1 mRNA相对表达量均较高(P<0.05).Logistic相关分析结果显示,子痫前期胎盘组织Nkx2-5和Sam68 mRNA相对表达量与围产儿死亡均密切相关(P<0.05);Pearson线性相关分析结果显示,子痫前期胎盘组织Nkx2-5和Sam68 mRNA相对表达量与胎盘组织sFlt-1 mRNA相对表达量均呈正相关(r=0.886,0.879,P<0.05).结论 Nkx2-5和Sam68在子痫前期胎盘组织中的表达水平较高且与其病情相关因子sFlt-1和围产结局相关,Nkx2-5和Sam68可能参与子痫前期的发生、发展.
