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pEGFP-BMI-1文献资料
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pEGFP-BMI-1真核表达载体的构建、鉴定及其表达
本研究构建真核表达载体pEGFP-BMI-1并观察其在HeLa细胞中的表达.将BMI-1逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)产物克隆入pEGFP-N1,经酶切、PCR鉴定及测序分析,构建pEGFP-BMI-1真核表达载体;采用脂质体转染法,将融合基因pEGFP-BMI-1转入HeLa细胞,用荧光显微镜和Western blot检测其表达,SYBR Green I实时定量RT-PCR方法检测转染前后HeLa细胞中P16INK4amRNA的表达变化.结果表明:重组后的pEGFP-N1质粒已成功载入BMI-1的全长编码基因,序列测定的结果与预期设计完全一致.荧光显微镜下可见在转染pEGFP-BMI-1的HeLa细胞中存在荧光分布;Western blot检测发现存在外源性融合蛋白BMI-1-EGFP的表达.在HeLa细胞中过表达BMI-1显著下调P16INK4amRNA的表达为对照组的9.2%(p＜0.01).结论:成功构建了真核表达质粒pEGFP-BMI-1,转染HeLa细胞后可表达融合蛋白BMI-1-EGFP.这为今后研究BMI-1在肿瘤发生发展中的机制奠定了基础.
关键词： pEGFP-BMI-1 BMI-1 基因转染 Hela细胞 p16INK4a
