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S1P/S1PR信号通路对中性粒细胞功能的影响
本研究旨在检测1-磷酸鞘氨醇(S1P)对fMLP活化的中性粒细胞的引发作用,检测粒细胞活化后发生呼吸爆发的产物,并探究S1P引发作用的信号通路.流式细胞术检测新鲜分离的中性粒细胞的状态；高铁细胞色素C还原法间接计算超氧阴离子(O2-)释放量；二氢罗丹明123流式细胞术检测粒细胞的呼吸爆发程度；免疫印迹法检测PI3K-Akt信号通路相关蛋白的表达.结果表明,S1P预处理后fMLP活化的粒细胞所释放的O2-量明显增高；S1P引发的fMLP活化组中,罗丹明123的平均荧光强度明显高于fMLP单独处理组；PI3K及Akt蛋白参与了粒细胞呼吸爆发的信号传递.结论:S1P是一种新的粒细胞引发试剂,较高浓度S1P( 10-6μmol/L)能够引发fMLP活化的中性粒细胞发生呼吸爆发；该信号通路可能为S1P与粒细胞上的S1P受体作用,活化下游的PI3K,再通过Akt传递信号,终活化NADPH氧化酶,发生呼吸爆发.
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p55PIK N末端24个氨基酸抑制甲状腺癌细胞增殖的研究
目的 观察P55PIK的N端的24个氨基酸抑制甲状腺癌细胞增殖的作用.方法 构建含有P55PIK-N端24个氨基酸的腺病毒载体Ad-N24-p55PIK-GFP及对照病毒Ad-GFP,以其感染甲状腺癌YTC236细胞,流式细胞仪检测细胞周期进程,应用BrdU掺人的方法 检测其对细胞DNA合成的影响,通过建立体内肿瘤裸鼠移植瘤模型,进一步证实Ad-N24p55PIK-GFP的抗肿瘤作用.结果 对照腺病毒Ad-GFP感染的细胞中G0/G1期细胞为(69.83±3.50)%,S期和G2/M期细胞数分别为(18.56±3.10)%和(11.61±2.90)%,而带有插入目的 基因的腺病毒Ad-N24p55PIK-GFP感染后的细胞G0/G1期细胞减少为(45.81±2.10)%,S期和G2/M期细胞增加至(30.12±2.60)%和(24.07±2.90)%,BrdU掺入显示BrdU阳性的细胞数由(21.2±3.0)%降至(8.1±2.2)%,FTC236细胞裸鼠移植瘤模型局部应用Ad-N24p55PIK-GFP后肿瘤生长显著减慢.结论 在FTC236细胞中,过表达p55PIK的N末端的24个氨基酸可有效阻滞细胞周期进程,抑制细胞DNA合成,体外有效抑制甲状腺癌裸鼠移植瘤模型的肿瘤生长.
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宫内生长受限大鼠肝脏磷酸肌醇-3-激酶信号通路分子的变化
目的 研究宫内生长受限(IUGR)成年子鼠肝脏中受体后胰岛素信号传导通路分子的表达变化,探讨IUGR个体发生2型糖尿病的分子机制.方法 通过低蛋白饮食法建立大鼠IUGR模型,采用Western blot检测雄性子鼠(8周)基础状态下肝脏中胰岛素受体底物(IRS)2、磷酸肌醇-3-激酶(PI-3K)、糖原合成酶激酶(GSK)3B的蛋白表达水平,以及胰岛素刺激后蛋白激酶B(PKB)的磷酸化水平变化.结果 基础状态下,IUGR成年子鼠肝脏IRS-2的蛋白表达与正常对照差异无显著性,PI-3K的催化亚单位p110的蛋白表达比对照组明显降低;而GSK-3β蛋白含量比对照组明显增加,差异均有显著性(P<0.01).基础状态和胰岛素刺激状态下,IUGR组肝脏PKB和磷酸化的PKB-Ser473表达水平都明显低于对照组(P<0.01),胰岛素刺激后,对照组肝脏磷酸化的PKB-Ser473表达明显增加,是基础状态的182%(P<0.01),而IUGR组肝脏磷酸化的PKB-Ser473的增加幅度较小,仅是基础状态的123%(P<0.05).结论 宫内蛋白营养不良造成的IUGR鼠机体胰岛素抵抗的发生可能与肝脏中PI-3K和其下游靶蛋白PKB的表达和活性降低,以及GSK-3β的表达增高有关.
