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大容量人源Fab噬菌体展示抗体库的构建及抗CD276抗体筛选
目的：构建大容量人源 Fab 噬菌体库，筛选并鉴定抗CD276的特异性抗体。方法通过采集10位健康成人的外周血淋巴细胞，提取总RNA，利用 RT-PCR 扩增人 Fab 抗体基因片段，插入噬菌体载体 pCANTAB5H 中，构建人源 Fab 噬菌体抗体库。通过固相化的抗原对抗体库进行3轮筛选后，随机挑取96个单克隆进行 phage-ELISA 鉴定，筛选出与抗原具有较强结合性的噬菌体克隆。结果成功构建库容为5×1010的噬菌体抗体库，从中筛选到11株阳性克隆，对其进行测序鉴定，表明该11株克隆的序列均一致，ELISA 证实其对抗原 CD276具有较强的结合性。结论构建了大容量人源 Fab 抗体库，从中获得具有抗CD276的人源 Fab 抗体片段，为进一步的研究和应用提供实验基础。
关键词： 免疫球蛋白 Fab 片段 噬菌体展示抗体库 CD276 -
人噬菌体抗体库的构建及人源性IL-17单链抗体的筛选
目的 通过噬菌体展示技术构建人源单链抗体库,筛选抗IL-17的特异性抗体并鉴定.方法 通过采集35位类风湿关节炎患者的外周血淋巴细胞,提取总RNA,逆转录合成cDNA,PCR扩增人H链和L链可变区抗体基因.利用SOE-PCR法将VH和VL片段拼接成ScFv片段并插入噬菌体载体pCANTAB5E中,构建人源噬菌体单链抗体库.通过固相化的抗原对抗体库进行3轮筛选后,挑取单克隆进行phage-ELISA鉴定,筛选与抗原具有较强结合性的噬菌体克隆.结果 成功构建库容为3.5×108的噬菌体抗体库,从中筛选到5株阳性克隆,ELISA证实其对抗原IL-17具有较强的结合性及中和活性.结论 成功构建了人源噬菌体单链抗体库,从中获得具有抗IL-17的人源ScFv抗体片段,为进一步的研究和应用提供实验基础.
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蛋白质组学时代的噬菌体抗体库技术
抗体是蛋白质组学研究的核心工具,噬菌体抗体库技术是一种高效的抗体生产技术,蛋白质组学研究对该技术提出了新的要求,本文对此作一综述.
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β-淀粉样蛋白特异性单链抗体的制备及鉴定
目的 制备1株人源性的β-淀粉样蛋白(A β)特异性单链抗体(scFv),并进行性能鉴定.方法 利用噬菌体展示技术,用20个AD病人的外周血B细胞首次构建了AD患者的单链可变区噬菌体抗体库.以A β1-40为靶,挑选出77个阳性抗体克隆,从中筛选出一株抗A βB单链抗体H1,对其重链和轻链可变区基因进行测序分析.通过表达载体pET28a(+)对日的蛋白进行大量表达,并利用Western-blot对单链抗体H1的免疫活性进行鉴定.结果 成功构建出AD患者的单链可变区噬菌体抗体库,库容量为1.5×10~6.从库中筛选并表达出一株抗A β1-40的单链抗体H1,DNA测序结果证实了其抗体的基因结构及氨基酸序列.Western-blot检测证实该抗体可特异性结合A β1-40.结论 利用噬菌体抗体库技术可成功制备A β肽特异性单链抗体,为AD患者的临床诊断和被动免疫治疗提供了一种新的可供选择的途径.
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老年痴呆噬菌体抗体库的构建及抗Aβ肽单链抗体的筛选
目的: 构建人源性的老年痴呆(AD)噬菌体抗体库,筛选1株人源性的β-淀粉样蛋白(Aβ)特异性单链抗体(scFv).方法: 利用噬菌体展示技术,用20个AD患者的外周血B细胞首次构建了AD患者的单链可变区噬菌体抗体库.以Aβ40为靶,挑选出77个阳性抗体克隆,从中筛选出一个抗Aβ scFv-H1,并对其重链和轻链可变区基因进行测序分析.利用预吸附实验及竞争性ELISA测定该抗体对Aβ40的特异性及结合位点. 结果: 成功构建出AD患者的单链可变区噬菌体抗体库,库容量为1.5×106.从库中筛选出1株抗Aβ40的单链噬菌体抗体-H1,DNA测序结果证实了其抗体的基因结构及氨基酸序列.预吸附及竞争性ELISA证实该抗体对Aβ40的结合表位位于蛋白氨基端的1到16个氨基酸内. 结论: 利用噬菌体抗体库技术可成功制备Aβ肽特异性scFv,为AD患者的临床诊断和被动免疫治疗提供了一种新的可供选择的途径.
