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大容量人源Fab噬菌体展示抗体库的构建及抗CD276抗体筛选
目的：构建大容量人源 Fab 噬菌体库，筛选并鉴定抗CD276的特异性抗体。方法通过采集10位健康成人的外周血淋巴细胞，提取总RNA，利用 RT-PCR 扩增人 Fab 抗体基因片段，插入噬菌体载体 pCANTAB5H 中，构建人源 Fab 噬菌体抗体库。通过固相化的抗原对抗体库进行3轮筛选后，随机挑取96个单克隆进行 phage-ELISA 鉴定，筛选出与抗原具有较强结合性的噬菌体克隆。结果成功构建库容为5×1010的噬菌体抗体库，从中筛选到11株阳性克隆，对其进行测序鉴定，表明该11株克隆的序列均一致，ELISA 证实其对抗原 CD276具有较强的结合性。结论构建了大容量人源 Fab 抗体库，从中获得具有抗CD276的人源 Fab 抗体片段，为进一步的研究和应用提供实验基础。
关键词： 免疫球蛋白 Fab 片段 噬菌体展示抗体库 CD276 -
CD276和CD133在结直肠癌及癌前病变中的表达及意义
拟探讨CD276及CD133在结直肠癌(CRC)发生、发展中的作用.采用免疫组化方法检测CD276及CD133在CRC及癌前病变组织中的表达情况.研究结果显示,CD276CD133在CRC组呈高表达,均高于腺瘤组及非腺瘤性息肉组,CD276及CD133单一表达和双阳性表达均与CRC的淋巴结转移、远处转移及生存相关,提示CD276及CD133在CRC的发生、发展中起一定作用,且与CRC的不良预后相关.
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沉默CD276基因促进宫颈癌Caski细胞的凋亡及作用机制研究
目的:探究免疫共刺激分子CD276在宫颈癌细胞(Caski、Hela)和人源胚胎肾细胞(293T)中的表达量,以及靶向沉默CD276基因来研究CD276对宫颈癌Caski细胞增殖、凋亡影响以及作用机制.方法:荧光定量PCR(RT-PCR)和免疫印迹试验(Western blot)检测CD276在293T、Caski、Hela细胞的表达情况.通过脂质体Lipofectamine 2000体外转染control siRNA和CD276 siRNA至宫颈癌Caski细胞中,实验分为对照组、空转染组、CD276 siRNA组,采用Western blot检测Caski细胞中CD276蛋白的表达量.用细胞计数法(CCK-8)、膜联蛋白V-FITC(Annexin V-FITC)&碘化丙啶(PI)双染法检测Caski细胞的增殖、凋亡,酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞培养液上清中IL-8、血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白水平.结果:免疫共刺激分子CD276在Caski、Hela细胞中的表达量显著高于293T细胞(0.754±0.068 vs 0.261±0.032;0.852±0.087 vs 0.279±0.026;P<0.05);Caski细胞中的表达量显著高于Hela细胞(P<0.05).与对照组相比,CD276 siRNA组细胞中CD276蛋白的表达量明显降低(0.235±0.028 vs 0.863±0.091,P<0.05),显著抑制细胞的增殖(0.326±0.035 vs 0.659±0.068,P<0.05),诱导其凋亡[(23.487±2.579)％vs(5.489±0.632)％,P<0.05],下调IL-8(43.257±3.612 vs 125.369±18.478)、VEGF(136.751±13.269 vs 369.254±28.157)的蛋白水平(P<0.05).结论:CD276在宫颈癌细胞中的表达量显著增加,沉默CD276基因的表达,明显抑制Caski细胞的增殖,促进其凋亡,其作用与IL-8、VEGF的蛋白水平有关.
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NF-E1b与CD276在散发性结直肠癌中的表达及对其预后的影响
目的 探讨NF-E1b和CD276在散发性结直肠癌(sporadic colorectal carcinoma,SCC)中的表达及对其预后的影响.方法 收集焦作市人民医院2009年1月至2012年1月病理科术后石蜡标本136例,采用免疫组织化学法检测NF-E1 b、CD276在标本中的表达情况,同时对患者进行随访.分析NF-E1 b、CD276的表达情况与SCC临床病理特征及预后之间的关系.结果 NF-E1b、CD276在SCC中表达阳性率分别为66.18％(90/136)和54.41％(74/136).NF-E1b、CD276的表达情况与患者临床病理特征有关(P<0.05),NF-E1b阳性表达更多见于分期晚、分化低的患者,更易发生淋巴结转移;CD276阳性表达更多见于分期晚、分化低、肿瘤较小的患者,更易发生淋巴结转移.NF-E1 b阳性表达患者5年生存率为21.11％(19/90),低于阴性表达患者的63.04％(29/46),差异有统计学意义(P<0.05);CD276阳性表达患者5年生存率为33.78％(25/74),低于阴性表达患者的61.29％(38/62),差异具有统计学意义(P<0.05).NF-E1b的表达与CD276的表达之间呈正相关关系(P<0.05).Cox多因素分析显示,NF-E1b、CD276是影响SCC患者术后生存时间的独立因素.结论 NF-E1 b、CD276与SCC的临床病理特征有关;NF-E1 b、CD276阳性表达患者预后更差;NF-E1 b、CD276具有明显的相关性.NF-E1 b、CD276可为SCC患者的诊疗及预后预测提供参考依据.
