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长链非编码RNA MALAT1在骨肉瘤组织中的表达及其对骨肉瘤细胞侵袭和转移的影响
目的 观察长链非编码RNA MALAT1与骨肉瘤的相关性,探讨其在骨肉瘤细胞侵袭和转移中的作用机制.方法 应用即时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测2014年1月至2015年12月就诊于河南省新乡医学院第一附属医院和河南省平顶山市第一人民医院的20例骨肉瘤患者肿瘤组织和配对瘤旁组织中MALAT1的表达水平,应用Mann-Whitney U检验分析其与临床病理参数的关系.应用慢病毒载体、MALAT1 shRNA慢病毒载体转染骨肉瘤U-2OS细胞,分别应用qRT-PCR法检测MALAT1表达情况;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测肿瘤细胞的增殖能力;细胞侵袭实验检测肿瘤细胞侵袭能力;免疫荧光和Western blot法检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达.结果 在骨肉瘤患者肿瘤组织中MALAT1的表达水平高于配对瘤旁组织(P ＜0.01);MALAT1表达水平与淋巴结状态、远处转移(肺转移)相关(P＜0.01);MTT法结果显示,沉默MALAT1可抑制骨肉瘤U-2OS细胞增殖(P＜0.05);细胞侵袭实验结果显示,抑制MALAT1表达可降低U-2OS细胞的侵袭能力,与正常对照组和慢病毒载体组相比,差异有统计学意义(P＜0.01);免疫荧光和Westem blot结果显示,沉默MALAT1可下调Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin、基质金属蛋白酶7、c-MYC等的表达.结论 MALAT1在骨肉瘤组织中高表达并与肿瘤侵袭密切相关;MALAT1促进骨肉瘤侵袭的机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关.
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活化T细胞核因子非编码基因对人脐静脉内皮细胞调节作用的实验研究
目的 探讨活化T细胞核因子非编码基因(noneoding repressor of nuclear factor of activated T cells,NRON)在人脐静脉内皮细胞内过表达和干扰后,对活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T cells,NFAT)基因表达的影响,并探讨其对人脐静脉内皮细胞生长、成管能力和迁移能力的影响.方法 使NRON基因在人脐静脉内皮细胞中过表达,并使用短发夹RNA(shRNA)干扰培养成NRON过表达细胞系和shRNA干扰细胞系.各细胞系采用不同浓度的小牛血清(1％、2％、4％、8％和10％)处理48 h,观察其细胞生长变化.以正常HUVEC细胞系作为对照,另设加入pBABE空载体细胞系和pSuper空载体细胞系作为对照.采用非放射性细胞增殖实验、内皮细胞成管实验、内皮细胞迁移实验这几种血管内皮细胞功能实验,检测血管内皮细胞基本特性的变化.结果 非放射性细胞增殖实验结果显示,各细胞系采用不同浓度小牛血清处理48 h,其细胞生长均与小牛血清浓度呈正相关(正常HUVEC细胞系r=0.91;pBABE空载体细胞系,r=0.88:NRON过表达细胞系,r=0.89;pSuper空载体细胞系,r=0.95;shRNA干扰细胞系,r=0.97);与正常HUVEC细胞系和pBABE空载体细胞系比较,NRON过表达细胞系细胞增殖能力较低(各浓度P均＜0.05);与正常HUVEC细胞系和pSuper空载体细胞系比较,shRNA干扰细胞系增殖能力较高(各浓度P均＜0.05).细胞成管实验中,与正常HUVEC细胞系和pBABE空载体细胞系比较,NRON过表达细胞系细胞成管能力较低[分别为(23.33±3.01)条和(19.67±1.42)条比(8.33±0.12)条,P均＜0.05];与正常HUVEC细胞系和pSuper空载体细胞系[(17.33±2.93)条]比较,shRNA干扰细胞系[(36.00±0.51)条]细胞成管能力则较高(P均＜0.05).细胞迁移实验中,与正常HUVEC细胞系和pBABE空载体细胞系比较,NRON过表达细胞系细胞迁移数较少[分别为(5145±72)个和(4411 ±117)个比(1857±65)个,P均＜C.05];与正常HUVEC细胞系和pSuper空载体细胞系[(3883±109)个]比较,shRNA干扰细胞系[(6987±50)个]细胞迁移数较多(P均＜0.05).结论 NRON基因过表达和shRNA干扰,分别使NFAT基因呈抑制或激活状态.NRON基因过表达可抑制人脐静脉内皮细胞生长,减弱其成管能力和细胞迁移能力.shRNA干扰NRON后可促进人脐静脉内皮细胞生长,增强其成管能力和细胞迁移能力.
关键词： 内皮细胞 RNA 未翻译 NFATC转录因子类 -
平滑肌肉瘤中PRUNE2mRNA的表达及其与非编码RNA PCA3的一致性关系
目的 探讨平滑肌肉瘤中PRUNE2 mRNA的表达及其与非编码RNA PCA3的关系.方法 采用安捷伦基因表达芯片的方法检测31例平滑肌肉瘤和42例胃肠间质瘤中PRUNE2mRNA的表达水平,分析其表达与平滑肌肉瘤患者的预后关系；采用实时荧光定量聚合酶链反应的方法分析13例平滑肌肉瘤中PCA3mRNA和PRUNE2mRNA的表达水平并分析二者间的关系.7例前列腺癌组织作为PCA3mRNA表达的阳性对照.结果 在31例平滑肌肉瘤中,PRUNE2 mRNA的平均表达水平为368.43 ±29.67,高于37例胃肠间质瘤(82.56±7.45)和7例前列腺癌(4.76±0.98,均P＜0.05).PRUNE2mRNA高表达的平滑肌肉瘤患者的生存期与低表达者比较,差异无统计学意义(X2=0.96,P =0.326).PRUNE2mRNA高表达的胃肠间质瘤患者的生存期与低表达者比较,差异无统计学意义(x2=3.10,P=0.078).平滑肌肉瘤中PCA3 mRNA平均表达水平为26.38±3.04,低于前列腺癌(3272.00±240.87,P=0.004).在平滑肌肉瘤中,PCA3 mRNA与PRUNE2mRNA的表达呈正相关(rs=0.901,P＜0.001).结论 PRUNE2的表达与平滑肌肉瘤患者的生存期有关,PCA3的表达与PRUNE2 mRNA的表达呈正相关.
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长链非编码RNA对牙本质基质蛋白1的调控机制
目的 初步探究长链非编码RNA(lncRNA)对牙本质基质蛋白1(DMP1)基因表达的调控机制.方法 在MC3T3-E1细胞中,运用Western blot以及实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)实验观察lncRNA32865与DMP1的变化趋势.构建含有荧光素酶报告基因的DMP1启动子载体,并与lncRNA过表达质粒、si-lncRNA32865分别共转染后,观察DMP1启动子活性以及lncRNA32865对其的影响.数据进行统计学处理,以P<0.05为差异具有统计学意义.结果 Western blot以及实时荧光定量PCR实验结果显示,在MC3T3-E1细胞中过表达lncRNA32865时,DMP1基因表达量(0.236±0.022)较对照组降低(t=59.816,P<0.001),抑制lncRNA32865时,DMP1基因表达量(1.994±0.133)较对照组升高(t=-12.989,P=0.006).荧光素酶报告基因检测表明DMP1启动子有活性(t=-77.360,P<0.001).与转染DMP1启动子处理组(6.018±0.105)比较,DMP1启动子质粒与lncRNA32865过表达质粒共转染组荧光强度(3.877±0.120)显著降低(t=50.713,P<0.001),而DMP1启动子质粒与si-lncRNA32865共转染组荧光强度(17.296±0.674)显著增加(t=-26.612,P=0.001).结论 初步证明lncRNA32865与DMP1表达趋势相反,lncRNA32865通过与DMP1基因的启动子区相互作用,以此调控DMP1的基因表达.
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虫媒黄病毒RNA元件在病毒复制中的调控功能
RNA病毒的复制主要在细胞质中完成,包括病毒RNA的亚细胞定位、病毒复制相关蛋白的翻译与加工、病毒复制复合体(replication complex,RC)的组装、基因组子代RNA的合成等一系列紧密偶联的过程.为利于自身复制,RNA病毒从进化中获得了多种RNA顺式作用元件(cis-acting element).通过这些元件的调控作用,RNA病毒不但能以病毒特有的策略进行复制,还能模拟细胞mRNA代谢中的某些过程,从而缓解宿主细胞环境对病毒复制产生的竞争压力.
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胎源性疾病发生中表观遗传学变化的研究进展
近年来，多项针对“健康与疾病的发育起源（DOHaD）”学说展开的动物实验及流行病学调查研究发现，DNA甲基化、组蛋白修饰及非编码RNA的转录调控等表观遗传修饰可能是引发胎源性疾病的重要机制之一，如nr3c1和11β-hsd-2基因的异常甲基化可影响胎儿神经系统的发育，导致其出生后神经行为的异常即抑郁症、精神分裂症等精神障碍的发生；而组蛋白脱乙酰酶3（HDAC3）可引起胎儿第二心室发育过程中的形态缺陷及细胞外基质异常，与人类先天性心脏病的发病直接相关。现就胎源性疾病发生中表观遗传学变化的研究进展进行综述，可为部分胎源性疾病的预防及临床诊断与治疗提供重要的理论基础及可靠的实验依据。
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上皮性卵巢癌相关的长链非编码RNA的研究进展
机体内大约70%的RNA不编码蛋白质,其中长度超过200个核苷酸的一类被称为长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA).lncRNA虽然不编码蛋白质,但具有复杂的调控基因表达的功能.lncRNA的表达具有时间特异性、组织特异性和疾病特异性的特点,近年来在肿瘤发生发展中的作用日趋受到重视,被看作是有潜力的肿瘤标记物以及治疗靶点.上皮性卵巢癌是常见的卵巢癌,目前尚缺乏敏感的早期筛查指标和有效治疗方案,且病死率仍位居妇科恶性肿瘤首位.关于lncRNA在上皮性卵巢癌组织和细胞系中表达量变化、功能以及作用机制的研究方兴未艾,并成为研究热点.总结目前发现的lncRNA对上皮性卵巢癌发生、发展的影响以及lncRNA发挥作用的相关机制,有助于进一步了解上皮性卵巢癌发病机制,发掘更加敏感的肿瘤标记物以及更加有效的治疗靶点.
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长链非编码RNA在子宫内膜癌中的研究进展
长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)在机体多种病理生理过程中均发挥极其重要的调控作用,其功能失调与肿瘤发生发展关系密切,因其数量大、种类多且功能多变,成为近年来多种疾病机制研究的热点.子宫内膜癌(endometrial carcinoma)是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一,和IncRNA之间关系密切.lncRNA在子宫内膜癌中的研究越来越多,随着研究技术和方法不断进步,探明其对子宫内膜癌的调控机制,将有助于深入揭示子宫内膜癌的发生和发展,也可为该疾病的早期诊断和治疗提供新的思路,并有望作为新的预后相关标记物和药物治疗的靶点.现综述lncRNA在子宫内膜癌中的研究进展.
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miRNA和lncRNA及相关信号转导通路对滋养细胞浸润功能的影响及其机制
微小RNA(miRNA)是一种内源性表达的小分子非编码RNA,通过转录后抑制调控约30％的基因表达,很多研究表明miRNA在调控滋养细胞复制、迁移、浸润等功能中发挥重要作用.长链非编码RNA(lncRNA)是长度大于200个核苷酸的非编码RNA,通过表观遗传效应、细胞周期调控和细胞分化调控等影响滋养细胞复制、迁移、浸润等.细胞内信号通路的正常传导保证滋养细胞浸润功能正常而不会如肿瘤细胞一样无限制地生长和侵袭.不同的RNA或不同的信号通路所作用的靶点不同,终引起滋养细胞浸润功能改变的过程也不相同.综述近年非编码RNA及其相关信号转导通路对滋养细胞浸润功能所产生的影响及机制.
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piRNA在生殖系统中的研究进展
Piwi蛋白相互作用RNA（piRNA）是一类长度约为30个核苷酸的非编码RNA。目前研究提示piRNA通过与PIWI蛋白家族成员结合后，参与异染色质形成、生殖细胞的发育和维持DNA的完整性。piRNA与小干扰RNA （siRNA）及微小RNA（miRNA）均是近些年发现的非编码小RNA，在功能、分布和分子特征等方面存在着显著不同。piRNA在精子的发生过程中起着重要的生理调节作用，目前对于piRNA的研究逐渐深入，认识也进一步提高。例如， piRNA的结构特点，发挥功能相关作用蛋白，在体内的分布与表达，在生物体内与PIWI发挥作用的方式以及功能。piRNA数据库的建立将对此类小分子RNA的研究有很大的促进作用。
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中枢神经系统长链非编码RNA的研究进展
中枢神经系统是一个非常复杂的生物系统,包含由不同类型的神经元和神经胶质细胞整合形成的动态神经网络,不同的神经网络负责介导中枢神经系统的高级认知和行为学功能.表观遗传修饰主要包括基因组DNA特定位点的甲基化以及组蛋白修饰等,与中枢神经系统稳态、应激反应、可塑性,甚至某些疾病的发生发展密切相关.这种共价修饰调节需要多种酶、蛋白复合物以及分子脚手架等的有序参与,但具体的作用机制不清.
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长链非编码RNA H19在急性胰腺炎患者血清中的表达及意义
目的 探讨急性胰腺炎患者血清中长链非编码RNA(IncRNA) H19的表达及临床意义.方法 选取2013年1月-2015年12月在沈阳市急救中心急诊科及综合外科诊断为急性胰腺炎的患者82例以及健康者20例.采集急性胰腺炎患者及健康者的外周血,分离血清提取RNA,利用Real-time PCR检测IncRNA H19的表达水平,分析H19的表达与其他临床病理指标的关系.计量资料组间比较采用t检验,计数资料组间比较采用X2检验;利用受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析IncRNA H19对急性胰腺炎的诊断价值.结果 急性胰腺炎患者急性期血清中的lncRNA H19表达水平明显高于健康对照组,差异有统计学意义(t=2.364,P=0.020);重型急性胰腺炎组患者比轻型急性胰腺炎组lncRNA H19表达水平高(t=2.111,P=0.037),Balthazar CT分级＞C级患者的lncRNA H19表达水平高于CT分级≤C级的患者,且差异有统计学意义(=2.312,P=0.022).ROC曲线分析显示H19的检测可以帮助诊断急性胰腺炎(ROC曲线下面积为0.752,95％可信区间:0.636 ～ 0.867,P＜0.01).结论 IncRNA H19在急性胰腺炎患者的血清中表达升高,且对于急性胰腺炎诊断和严重程度的预判具有一定临床价值.
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非编码RNA在溃疡性结肠炎中作用的研究进展
溃疡性结肠炎(UC)是一种主要累及结直肠的慢性非特异性炎症性疾病,其病因尚未完全明确,常反复发作,并可发生癌变.非编码RNA(ncRNA)如微RNA(microRNA)、长链ncRNA(lncRNA)、环状RNA(circRNA)等在机体生长、发育以及疾病发生、发展中发挥重要作用.ncRNA可通过促进炎症细胞浸润、削弱肠黏膜屏障功能、诱导肠上皮细胞凋亡等多种机制,引起UC发生,并参与其癌变.本文就 ncRNA在 UC中作用的研究进展作一综述.
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非编码RNA在Barrett食管中作用的研究
非编码RNA(ncRNA)是一类不编码蛋白质的RNA,在人体生长发育和疾病发生发展等过程中起重要作用.Barrett食管(BE)为食管腺癌的癌前病变.多项研究表明,ncRNA在疾病的诊断、治疗和药物靶向设计中具有潜在的应用价值.本文就ncRNA(主要是微RNA、长链非编码RNA和环状RNA)在BE发生、发展和癌变过程中的作用作一综述.
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长链非编码RNA AFAP1-AS1在消化系统肿瘤中的表达及意义
目的:探讨长链非编码RNA (long non-coding RNA,lncRNA)肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1(actin filament-associated protein 1-antisense RNA1,AFAP1-AS1)在食管癌、胃癌、肝癌和结直肠癌4种常见消化系统肿瘤组织中的表达情况及其临床意义.方法:采用组织微阵列切片初步筛查82例肿瘤组织(包括食管癌11例、胃癌11例、肝癌26例和结直肠癌34例)及对应癌旁组织中AFAP1-AS1的表达情况.对表达差异明显的肿瘤组织类型(肝癌),再扩大样本量(70例石蜡切片和30例新鲜组织),通过原位杂交和实时荧光定量PCR法进一步检测验证,并分析AFAP1-AS1表达与肝癌主要临床病理特征的相关性,评估其在肿瘤淋巴结转移中的作用.结果:AFAP1-AS1在食管癌中的表达水平高于癌旁组织(P＜0.05),在肝癌组织中的表达水平低于癌旁组织(P＜0.05),在胃癌和结直肠癌中其表达与癌旁组织中的表达水平没有明显差异(P＞0.05).扩大肝癌组织样本量后,仍然发现肝癌组织中的AFAP1-AS1水平明显下调,并且与临床分期和淋巴结转移有关(P＜0.05).AFAP1-AS1作为肝癌淋巴结转移的分子标志物的灵敏度、特异度、符合度、阳性预测率和阴性预测率分别为91.23％、28.21％、65.62％、68.75％和65.00％.结论:lncRNA AFAP1-AS1可能与肝癌、食管癌的发生和发展有关,并且在肝癌和食管癌中起到不同的生物学作用;AFAP1-AS1可能成为新的肝癌分子标志物,应用于肝癌临床诊断.
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环状RNA在乳腺癌中作用的研究进展
环状RNA是一类共价闭合环状非编码RNA,一般较为保守且稳定,广泛存在于各种生物体内.近年来,环状RNA在肿瘤治疗中的作用成为了一个研究热点,其中包括乳腺癌相关性环状RNA.研究显示,环状RNA在乳腺癌患者的血清及肿瘤组织中异常表达,且在不同分子分型的乳腺癌组织中表达具有特异性.异常表达的环状RNA与多种肿瘤相关基因都有密切的联系,它可通过结合微RNA或其他生物分子抑制后者的功能,直接或间接影响乳腺癌相关基因的表达,从而一方面影响乳腺癌细胞的增殖、侵袭与凋亡,另一方面影响乳腺癌患者对化疗药物的不良反应及耐药性.本文从环状RNA的生物学特征、功能以及近年来其在乳腺癌发生、发展及化疗药物耐药等方面的研究进展进行综述.
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银屑病表观遗传学进展
银屑病是一种复杂的多基因遗传病,有家族遗传倾向,但并非每个子代均发病.表观遗传是指DNA序列不发生变化但基因表达却发生可遗传的改变,它从以下3个层面上调控基因的表达:DNA甲基化、组蛋白修饰及非编码RNA调控(如RNA干扰),与遗传印记、X染色体失活等临床现象有关.肿瘤及多种自身免疫性疾病都有表观遗传学的改变.综述银屑病表观遗传学方面的研究进展,以探讨银屑病的发病机制.
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长链非编码RNA对急性心肌梗死影响的研究进展
长链非编码RNA(lncRNA)作为非蛋白编码RNA中的一员,对急性心肌梗死(AMI)的病理过程:包括心肌细胞凋亡、炎症反应、血管生成、纤维化修复和心脏重构具有重要调节作用.为此本文总结了lncRNA对AMI影响的新进展,为AMI治疗及预后提供潜在靶点.
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非编码RNAs在心血管疾病中作用的研究进展
心血管疾病具有高发病率,高死亡率的特点,其发病的主要病理基础之一是基因表达的失调.非编码RNA(ncRNA)是一类不编码蛋白的转录本,越来越多的研究表明它发挥着重要作用,包括转录、RNA成熟、翻译、蛋白质降解等方面,并参与肿瘤,心血管疾病等疾病的病理进程.本文将着重概述微小RNA和长链非编码RNA的生物学功能及其在心血管疾病的研究进展.
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长链非编码RNA在心血管疾病中的作用
测序和基因组技术的新进展已经发现数千以前未注释的长链非编码 RNA(lncRNA).lncRNA参与多种生理学和病理学过程.本文就心血管lncRNA功能特征进行总结和探讨.
